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电压门控钾通道Kv1.4、Kv4.1在戊四唑致病大鼠海马区表达的研究

作　者: 李亚伟
导　师: 邹飒飒
学　校: 遵义医学院
专　业: 神经内科
关键词: 电压门控钾通道戊四唑全身强直阵挛发作性癫痫海马 Kv1.4和Kv4.1
分类号: R742.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：癫痫(epilepsy)是一组由脑神经元过度放电所致的突然、反复和短暂的中枢神经系统功能失常为特征的慢性临床综合征。近年来,人们从基因、分子细胞学、电生理学等方面探索癫痫的发病机制,结果发现离子通道与癫痫的发病密切相关。钾通道是分布最广、类型最多的一类离子通道,它存在于所有的真核细胞,主要参与细胞膜静息电位和动作电位复极化过程的调节,决定着动作电位的发放频率和幅度。钾离子通道Kv1.4和Kv4.1共同表达于神经细胞,通过该通道的钾离子形成一瞬时外向性钾电流即A-型钾电流(IA)。这种钾通道在低于阈电位时开始被激活,产生IA抵消了刺激电流,去极化几乎被抑制,延长膜电位去极化。因此,Kv1.4和Kv4.1通道均参与复极化电位调节,是影响锋电位阈值以及重复发放电的主要机制。本实验通过免疫组化染色及Western Blot技术检测致痫前后大鼠海马区Kv1.4和Kv4.1蛋白的表达情况,探讨Kv1.4和Kv4.1是否与癫痫发病相关,为癫痫的诊治提供实验依据。方法：腹腔注射1%戊四唑(PTZ)溶液40mg/kg,于10min后注射20mg/kg复制急性全身强直阵挛发作癫痫模型(GTCS)。随机将实验动物分为对照组和成功致痫后1h、24h、72h组。于上述不同时间点处死大鼠,留取大脑组织,将脑组织分成两半。一半用于免疫组化染色,检测钾通道Kv1.4、Kv4.1蛋白表达情况；另一半脑组织分离出海马行Western Blot检测钾通道Kv1.4、Kv4.1蛋白水平。结果：1、大鼠癫痫模型制作结果：实验组30只大鼠于二次注射PTZ后27只出现全身阵挛、角弓反张、四肢强直、跌倒,达到Racine标准4-5级,脑电图出现明显异常,表现为散在性棘波、尖波、慢波、棘-慢复合波,另外3只大鼠死亡,剔除实验组。2、免疫组化染色检测Kv1.4、Kv4.1蛋白海马区表达变化结果：Kv1.4在对照组和实验组均有表达,并且在大鼠海马中广泛分布。对照组：高倍镜下可见胞浆和胞膜及轴突上有阳性反应颗粒,以CA1、CA3区最为明显。实验组海马阳性细胞较对照组减少,阳性细胞一般为梭形,着色较浅,少有突起。实验组(1h、24h和72h)海马各区的平均光密度值与对照组相比均有显著性差异(P<0.05)。实验组各时间段之间无明显差异(P>0.05)。Kv4.1：Kv4.1在对照组和实验组均有表达,并且在大鼠海马中广泛分布。对照组：高倍镜下可见胞浆和胞膜上有棕黄色阳性反应颗粒,阳性细胞着色较浅。实验组海马阳性细胞较对照组增加,阳性细胞一般为梭形,以CA1和CA3区表达明显。实验组(1h、24h和72h)海马各区的平均光密度值与对照组相比均有显著性差异(P(0.05),实验组各时间段之间无明显差异(P)0.05)。3、Western Blot技术检测Kv1.4、Kv4.1蛋白相对浓度的结果：在海马神经元中Kvl.4、Kv4.1蛋白均有表达,实验组大鼠海马区Kv1.4表达下降,Kv4.1表达上调；致痫后1h、24h、72h大鼠海马区Kv1.4、Kv4.1蛋白相对浓度与对照组相对浓度均有明显差异(P<0.05)；而实验组各时间段之间两两比较均无明显差异(P>0.05)。结论：1、实验大鼠注射PTZ致痫后脑组织海马区电压门控钾离子通道Kv1.4表达减少2、实验大鼠注射PTZ致痫后脑组织海马区电压门控钾离子通道Kv4.1表达增加,

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英文缩略词表 4-6中文摘要 6-8Abstract 8-11前言 11-12材料与方法 12-18结果 18-24讨论 24-27结论 27-28参考文献 28-30综述 30-37 参考文献 35-37致谢 37-38作者简介 38

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