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海洋真菌胞外多糖的结构及抗氧化活性研究

作　者: 王春宴
导　师: 毛文君
学　校: 中国海洋大学
专　业: 药物化学
关键词: 海洋真菌胞外多糖结构特征抗氧化活性
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

海洋中蕴藏着丰富的微生物资源，红树林生态系统和江河入海口位于海洋与陆地交界的特殊环境，其微生物种类及其产物也具有自己的特色。本文从五株不同来源海洋真菌的发酵液中提取胞外粗多糖，经分离纯化得到纯品多糖，并对所得的多糖组分进行化学组成、结构和抗氧化活性的研究。研究结果如下：1.从老鼠簕枝叶内生土曲霉菌Aspergillus. terreus W-8，海芒果根泥来源真菌黄柄曲霉Aspergillus flavipes ZHN1-09和海桑深层根泥真菌PJX-2的发酵液中分别提取得到三个胞外粗多糖LN, LD和PJX，利用Q-Sepharose Fast Flow离子交换层析，Surperdex-75和Sephacryl S-100凝胶渗透层析分离纯化得到五个多糖组分lnw-c, ds2-2, ds4-1, jxw-2和jxs-2。经柱前衍生高效液相色谱（PMP-HPLC）和高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）分析表明，lnw-c中含有约2:1:1的GlcN，Man和Glc，为碱性多糖，ds2-2, ds4-1, jxw-2和jxs-2均含有高比例的Man。jxw-2和jxs-2为中性多糖，纯度均达到90%以上，分子量分别为5.6和9.7kDa。红外光谱和甲基化分析表明，jxw-2，jxs-2和ds2-2均以Man(1→，→2)Man(1→，→6)Man(1→和→2,6)Man(1→四种连接方式为主，且jxs-2具有β-型糖苷键构型；lnw-c除甘露糖的连接片段外，还含有→6)Glc(1→和→2,6)Glc(1→的连接片段。2.从黄河三角洲水域梭鱼的内脏共附生土曲霉Aspergillus terreusOUCMDZ-1925的发酵液中提取多糖，经Q-Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sephacryl S-100凝胶渗透层析分离纯化得到两个多糖组分yw-2和yss。化学和HPGPC分析表明，yss纯度达到94.04%，分子量为18.6kDa。PMP-HPLC分析表明，yss由Man和Gal以7.70:1.00的比例构成。红外光谱、甲基化、一维，二维核磁共振波谱（1D,2D NMR）分析表明，yss为分支度较高的中性杂多糖，其主链主要含有→2)-α-D-Manp(1→和少量→6)-α-D-Manp(1→，支链位于→2)-α-D-Manp(1→的C-6，分支由→1)-α-D-Manp(6→1)-α-D-Manp和β-D-Galf(1→组成。该研究首次从梭鱼内脏真菌土曲霉Aspergillus terreus发酵液中分离得到结构新颖的以→2)-α-D-Manp(1→和→6)-α-D-Manp(1→为主链的半乳葡聚糖，表明海洋共附生真菌是结构新颖的胞外多糖的重要来源。3.从海南文昌红树林根泥共附生青霉菌Penicillium sp.H-25-02中分离得到粗多糖YQ，利用Q-Sepharose Fast Flow离子交换层析和Sephacryl S-100凝胶渗透层析纯化得到qw-2，qs1-1, qs-2s和qs-3a四个多糖组分。化学和HPGPC分析表明，所有多糖组分的糖含量均高于89%，qw-2，qs1-1, qs-2s和qs-3a的分子量分别为12.22,16.17,20.96和22.87kDa。PMP-HPLC分析表明，四种多糖均以Man为主，且qs1-1, qs-2s和qs-3a中含有少量的GalA,为酸性多糖。红外光谱和甲基化分析表明，四种多糖的结构连接方式多样，其中qs-2s和qs-3a中均具有少见的→6)Galf(1→，为结构新颖的胞外多糖。对qs-2s进行部分酸水解研究表明，其结构中的→6)Galf(1→和Galf(1→均位于侧链部分。4.以体外DPPH自由基，超氧阴离子自由基和羟基自由基清除活力为评价指标，研究了上述多糖的抗氧化活性。结果表明，所有多糖均表现出一定的抗氧化活性；多糖样品在0~8.0mg/mL时，对自由基的清除均呈现浓度依赖性；多糖组分qs-2s，qs-3a，yss和ds4-1清除DPPH自由基的EC50值分别为3.5,5.0,2.8和1.0mg/mL；qs-2s, yss和jxs-2的清除羟基自由基的EC50值分别为3.5,3.8,6.0mg/mL；多糖组分对超氧阴离子自由基的清除率均不高于50%。本论文为我国“海洋糖库”的建设提供了结构新颖的海洋真菌多糖，为抗氧化活性多糖的研究提供了物质基础，对进一步研究海洋微生物胞外多糖具有重要参考价值。

海洋真菌胞外多糖的结构及抗氧化活性研究

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