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猴源细小病毒的人工感染及免疫预防研究

作　者: 靳小霞
导　师: 夏咸柱; 杨松涛
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 预防兽医学
关键词: 猴源细小病毒 分离鉴定 人工感染 抗体调查 免疫预防
分类号: S855.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


细小病毒(Parvovirus)是一类在自然界中分布极为广泛的DNA病毒。细小病毒科细小病毒属的主要成员包括犬细小病毒(CPV)、猫泛白细胞减少症病毒(FPV)、貂肠炎病毒(MEV)、阿留申病毒(ADV)等近20种病毒。猴细小病毒(simian parvovirus, SPV)是从有严重贫血的猕猴(cynomolgus monkeys)分离出的一种细小病毒。该病毒感染猴子的临床表现与人类感染人细小病毒B19(B19病毒)的临床表现有许多相似性[1]。本实验室从患有严重传染性腹泻的猴体内分离出一株猴源细小病毒,该毒株感染猴子的临床症状类似犬猫细小病毒性肠炎。VP2基因序列分析表明该病毒VP2基因序列与FPV VP2核苷酸的同源性为98.75%,与CPV VP2核苷酸的同源性为98.15%[2]。猴的感染表明,随着基因突变细小病毒的宿主范围和致病性在不断地在发生着变化,其如何实现跨越种间屏障及其能否跨种感染人类等问题仍不清楚。国内外尚未见到对其进行致病性、宿主范围、抗原性、免疫原性和血清学调查等研究。因此本研究通过分离鉴定获得一株猴源细小病毒;用该毒株分别实验感染对该病毒HI抗体小于1:2的1-2月龄健康家猫、家犬、食蟹猴、雪貂、水貂和荷兰兔各3只,另3只作对照,通过动物感染实验初步确定该分离株的致病性和动物感染范围;同时,为了解细小病毒在我国猴群中的感染情况,对2010年～2011年间收集的来自我国北京地区总计160只圈养猴的血清样品进行了猴源细小病毒HI抗体调查;为了解该猴源细小病毒的抗原性和免疫原性,本研究还研制了该猴源细小病毒的灭活苗并对其进行免疫实验研究。结果证实该病毒分离株为强毒株,可以突破种间屏障,感染猴、家犬和家猫;抗体调查结果显示猴血清的猴源细小病毒HI抗体阳性率为58.1 %,证实细小病毒在我国北京地区圈养猴群中感染比较普遍;免疫实验结果证实该毒株具有较好的免疫原性和抗原性,其灭活苗免疫接种猴能诱导产生抗细小病毒的特异性免疫反应。本研究为进一步确定该病毒分离株的动物感染谱、开展猴源细小病毒的流行病学调查及免疫预防奠定了基础。该病毒分离株是否为FPV或CPV变异株,如何跨种传播给猴并发生致病性突变尚需进一步研究。

全文目录


英文缩略词表  6-7
摘要  7-8
Abstract  8-10
前言  10-12
实验一 猴源细小病毒的分离与鉴定  12-19
  1 材料  12-13
    1.1 病料  12
    1.2 主要试剂  12-13
    1.3 主要器材  13
    1.4 细胞与病毒  13
    1.5 其它  13
  2 方法  13-15
    2.1 病毒分离  13
    2.2 样品及分离培养的病毒液中 DNA 的提取  13
    2.3 PCR 检测  13-14
    2.4 形态学观察  14
    2.5 半数细胞感染量(TCID50)  14
    2.6 血凝性实验  14
    2.7 VP2 基因扩增和序列分析  14-15
  3 结果  15-17
    3.1 病毒分离  15
    3.2 PCR 鉴定  15-16
    3.3 形态学观察  16-17
    3.4 半数细胞感染量(TCID50)  17
    3.5 血凝性实验  17
    3.6 VP2 基因序列测定与分析  17
  4 讨论  17-18
  5 小结  18-19
实验二 猴源细小病毒的动物感染谱实验  19-39
  1 材料和方法  19-22
    1.1 病毒和细胞  19
    1.2 实验动物  19
    1.3 病毒的培养与鉴定  19-20
    1.4 人工感染实验  20-21
    1.5 病理组织学观察与免疫组织化学染色  21-22
    1.6 超微结构观察  22
  2 结果  22-37
    2.1 病毒的培养与鉴定  22
    2.2 人工感染实验  22-35
    2.3 猴体回归实验  35-37
  3 讨论  37-38
  4 小结  38-39
实验三 猴血清猴源细小病毒抗体调查  39-49
  1 材料  39-40
    1.1 血清  39
    1.2 病料  39-40
    1.3 病毒和细胞  40
  2 方法  40-41
    2.1 样品和猪红细胞的处理  40
    2.2 HA/HI 基本操作方法  40
    2.3 缓冲液体系的选择  40
    2.4 缓冲液pH 值的选择  40
    2.5 兔血清浓度的选择  40
    2.6 猪红细胞浓度的选择  40-41
    2.7 反应温度的选择  41
    2.8 阿氏液浓度和保存期限的选择  41
    2.9 猴血清细小病毒抗体调查  41
  3 结果  41-46
    3.1 缓冲液的选择  41
    3.2 缓冲液pH 值的选择  41-42
    3.3 兔血清浓度的选择  42-43
    3.4 猪红细胞浓度的选择  43
    3.5 反应温度的选择  43-44
    3.6 阿氏液浓度的选择  44
    3.7 猴血清猴源细小病毒抗体调查  44-46
  4 讨论  46-47
  5 小结  47-49
实验四 猴源细小病毒免疫猴及攻毒保护实验  49-61
  1 材料  49
    1.1 病毒和细胞  49
    1.2 实验动物  49
    1.3 疫苗  49
    1.4 主要试剂和仪器  49
  2 方法  49-54
    2.1 猴源细小病毒灭活苗的制备  49-50
    2.2 灭活苗的检定  50-51
    2.3 猴免疫实验  51-53
    2.4 猴攻毒保护实验  53-54
  3 结果  54-59
    3.1 病毒的培养和毒力测定  54
    3.2 病毒的纯化和鉴定  54-55
    3.3 灭活疫苗的性状、稳定性与安全性  55-56
    3.4 灭活疫苗免疫小鼠血清效价的测定  56
    3.5 CPV VP2-CAV2 活载体苗及猴源细小病毒灭活苗对猴的安全性  56
    3.6 免疫猴抗猴源细小病毒抗体水平检测  56-57
    3.7 抗CAV-2 抗体检测  57-58
    3.8 免疫猴的外周血淋巴细胞转化试验  58
    3.9 攻毒保护实验  58-59
  4 讨论  59-60
    4.1 病毒的纯化  59
    4.2 免疫猴体液免疫和细胞免疫水平检测  59-60
  5 小结  60-61
结论  61-62
参考文献  62-65
附录  65-68
中文综述  68-81
个人简历  81-82
致谢  82

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 兽医传染病学 > 病毒病
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