学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

人卵巢癌细胞系SK-OV-3中肿瘤干/祖样细胞的研究

作　者: 赵惠丰
导　师: 邓为民；姚智
学　校: 天津医科大学
专　业: 免疫学
关键词: 卵巢癌 细胞系SK-OV-3 球形体形成细胞 肿瘤干/祖样细胞 分离 鉴定
分类号: R737.31
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 54次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的：肿瘤干／祖样细胞的分离及鉴定是肿瘤干／祖细胞研究领域中的关键性问题之一。本课题通过球形体形成法对人卵巢癌细胞系SK-OV-3中肿瘤干／祖样细胞进行分离、培养扩增,并对其干／祖样细胞的特性进行鉴定,为研究卵巢癌发病机理及治疗奠定基础。方法：1.球形体形成法分离人卵巢癌细胞系SK-OV-3中肿瘤干／祖样细胞。2.将以球形体形成法筛选出的球形体形成细胞于CM与SGM交替更换培养基观察其多向分化和自我更新的潜能。3.双层软琼脂集落形成实验软琼脂培养检测球形体形成细胞的非依赖性锚定生长能力。4.通过PI染色利用FCM观察球形体形成细胞的细胞周期分布特点。5.检测球形体形成细胞在10μg/ml DDP作用下的凋亡率,分析其对DDP的抵抗作用。6.流式细胞仪检测球形体形成细胞中SP细胞及ALDH+细胞的比例。7.实时荧光定量PCR检测球形体形成细胞中干／祖细胞基因Oct4、Nanog的表达情况。8.球形体形成细胞裸鼠体内致瘤性的检测。结果：1.人卵巢癌细胞系SK-OV-3细胞中的极少部分肿瘤干／祖样细胞可在无血清特殊生长培养基中以球形体样悬浮长并长期培养、扩增并可连续传代50代以上。2.球形体形成细胞可在CM中贴壁生长,再更换为SGM后,有极少部分细胞以球形体样悬浮。3.球形体形成细胞具有强锚定非依赖性生长能力,在双层软琼脂培养基中可呈克隆样生长,克隆形成率为6.83%,显著高于SK-OV-3细胞的克隆形成率0.41%。4.细胞周期结果表明：球形体形成细胞中处于G0／G1期的细胞高于SK-OV-3细胞。5.球形体形成细胞在10μg／ml DDP作用后的0、12、24、36小时的凋亡率依次为0.30%%、2.64%、3.13%、11.05%,而SK-OV-3细胞在同浓度DDP作用后的0、12、24、36小时的凋亡率依次为4.95%、9.59%、29.77%、44.23%,球形体形成细胞的有较强的对于DDP的抵抗性。6.流式细胞仪检测结果证实：球形体形成细胞中SP细胞(8.7%)、ALDH+细胞(25.05%)均高于SK-OV-3中SP细胞(0.6%)、ALDH+细胞(8.00%)的比例。7.通过实时荧光定量检测表明：球形体形成细胞中干／祖细胞基因Oct4、Nanog的表达较SK-OV-3细胞分别上调8.8925倍、9.8783倍。8.裸鼠移植试验还证实了球形体形成细胞的致瘤性比SK-OV-3细胞强100倍。结论：利用球形体形成法从人卵巢癌细胞系SK-OV-3中分离纯化出的球形体形成细胞在体外具有干／祖细胞的自我更新、无限增殖、多向分化、对DDP的抵抗性的特点及SP细胞和ALDH+细胞比例较高、干／祖细胞基因Oct4、Nanog上调,在裸鼠体内证实具有高致瘤性,初步表明这些球形体形成细胞具有肿瘤干／祖细胞的特性。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-9
符号说明  9-10
前言  10-12
  研究现状、成果  10-11
  研究目的、方法  11-12
一、人卵巢癌细胞系SK-OV-3中肿瘤干/祖样细胞的分离、培养扩增  12-16
  对象和方法  12-14
  结果  14-16
二、人卵巢癌细胞系SK-OV-3中肿瘤干/祖样细胞的鉴定  16-46
  实验一:球形体形成细胞在含血清培基中的分化  16-18
    对象和方法  16
    结果  16-18
  实验二:球形体形成细胞锚定非依赖性生长能力测定  18-21
    对象与方法  18-20
    结果  20-21
  实验三:球形体形成细胞的周期分布  21-24
    对象和方法  21-22
    结果  22-24
  实验四:测定球形体形成细胞对顺铂的抵抗作用  24-26
    对象和方法  24
    结果  24-26
  实验五:球形体形成细胞中SP细胞的检测  26-29
    对象和方法  26-27
    结果  27-29
  实验六:球形体形成细胞中ALDH~+细胞的检测  29-31
    对象和方法  29
    结果  29-31
  实验七:球形体形成细胞中Oct-4、Nanog基因的表达  31-44
    对象和方法  31-40
    结果  40-44
  实验八:球形体形成细胞裸鼠体内致瘤实验  44-46
    对象和方法  44
    结果  44-46
讨论  46-52
结论  52-53
参考文献  53-58
综述  58-69
  肿瘤干/祖细胞研究新进展  58-65
  综述参考文献  65-69
致谢  69-70

相似论文

  1. 附面层抽吸对扩压叶栅气动性能影响的数值研究,TH453
  2. 缝隙式扩压叶栅流动机理研究,TK474.8
  3. 高温分离器布置对循环流化床锅炉炉内动力场影响的研究,TK229.66
  4. 苹果多酚对γ射线引起的免疫系统损伤防护作用研究,S661.1
  5. 分离镜系统的滑模变结构控制及抖振抑制,TP273
  6. 扩展青霉TS414脂肪酶在毕赤酵母的表达、纯化及其催化外消旋萘普生酯化拆分的研究,Q814
  7. 乙草胺降解株Y3B-1的分离、鉴定及降解特性研究,X172
  8. 米曲霉FS-1脂肪酶发酵优化、分离纯化与酶学特性的研究,TQ925.6
  9. 金花茶多糖的分离纯化及化学结构的研究,S567.19
  10. 凡纳滨对虾虾头内源性蛋白酶分离纯化与酶学特性研究,S985.21
  11. 罗非鱼分离蛋白的制备及其性质研究,TS254.4
  12. 芴甲氧羰基-D-色氨酸及D-苯丙氨酸分子印迹聚合物的制备及分离性能研究,O631.3
  13. 雪莲果低聚果糖提取分离及分析研究,TS255.1
  14. 抑制植物病原菌的植物提取物筛选,S482.2
  15. 玉米凝集素性质及其在PGPR筛选中的应用,S513
  16. 藏药三果汤散抗氧化有效成分研究,R29
  17. 南京地区西花蓟马Frankliniella occidentalis （Pergande）的发生调查及其线粒体基因组研究,S433
  18. rd29A驱动RdreBlBI基因转化‘红颊’草莓的研究,S668.4
  19. 河南省小麦根腐线虫病原鉴定和RAPD分析,S435.121
  20. 豫西、豫北及冀南地区4个禾谷孢囊线虫群体种类和致病型鉴定及品种抗性研究,S435.121
  21. 水稻黄单胞菌tal （transcription activator-like）基因功能研究,S435.11

中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 女性生殖器肿瘤 > 卵巢肿瘤
© 2012 www.xueweilunwen.com