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不同H1N1流感病毒感染A549细胞的生物学特征及对细胞基因表达的影响研究

作　者: 杨霄星
导　师: 舒跃龙；杜宁；周剑芳
学　校: 中国疾病预防控制中心
专　业: 病原生物学
关键词: 甲型H1N1 流感病毒 A549 生物学特征 表达谱芯片 致病机制
分类号: R373
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


2009甲型H1N1流感疫情在数月内遍及全球,流感大流行影响了社会经济和人群健康。虽然大多数病例的自限性病征类似于季节性流感,但仍有部分既往健康的年轻患者迅速进展为重症甚至死亡。甲型H1N1流感病毒致病机制的研究对于疾病防控有重要意义。本研究的目的是：本研究旨在比较甲型H1N1流感病毒与季节性H1N1流感病毒感染人呼吸道上皮细胞系的生物学特征；并利用表达谱芯片在基因层面分析2009甲型H1N1流感大流行的代表株A/California/07/2009(H1N1)与季节性流感病毒代表株A/广东宝安/51/2008(H1N1)可能存在的致病机理的差异。本课题的主要内容包括：1.比较甲型H1N1流感病毒A/California/07/2009(H1N1)与季节性H1N1流感病毒A/广东宝安/51/2008(H1N1)以相同病毒量感染人呼吸道上皮细胞系A549细胞的生物学特征,包括感染率、病毒进入细胞的效率、感染后不同时间点的病毒复制、释放、细胞病变等。2.利用博奥22K人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片,得到A/California/07/2009(H1N1)与A/广东宝安/51/2008(H1N1)流感病毒感染A549细胞的基因表达谱,利用聚类分析和微阵列显著性分析筛选出每个时间点在两病毒感染的细胞中表达有显著性差异的基因,继而通过多种生物信息学公共数据库对这些差异表达基因的生物学功能注释,了解2009甲型H1N1流感病毒与季节性H1N1流感病毒对宿主细胞各种生物过程的影响和可能存在的致病机理的差异,解释甲型H1N1流感病毒感染机体所致的异于季节性流感的机体反应的原因。本课题的主要结果：1.A549细胞对A/California/07/2009(H1N1)和A/广东宝安/51/2008(H1N1)流感病毒均易感,且两种病毒均可在A549细胞内有效复制。然而其感染过程的早期阶段存在差异。A/California/07/2009(H1N1)病毒感染A549细胞时,进入细胞的效率偏低,但依然能在细胞内高效复制,使得其感染率峰值及病毒释放与A/广东宝安/51/2008(H1N1)相当。2.两种H1N1流感病毒感染A549细胞均表现出对宿主细胞的免疫抑制作用和抗凋亡作用,然而2009甲型H1N1流感病毒表现出的免疫抑制和抗凋亡作用弱于季节性流感病毒。多数差异表达基因变化趋势一致,不同点并非质的差别,而在于量的差异。仅有少数基因的变化趋势在两种病毒感染的细胞中不同。3.甲型H1N1流感病毒可以通过多种机制抑制宿主细胞的抗病毒反应,包括通过抑制细胞因子的产生、抑制天然免疫细胞(如NK)的活化、逃避巨噬细胞的识别,达到对宿主天然免疫反应的逃避。

全文目录


中文摘要  6-8
Abstract  8-10
前言  10-12
第一部分  12-19
  1. 材料与方法  12-15
    1.1 病毒  12
    1.2 细胞  12
    1.3 主要试剂  12-13
    1.4 细胞复苏与传代  13
    1.5 病毒繁殖与滴度测定  13-14
    1.6 病毒感染  14
    1.7 细胞病变效应观察  14-15
    1.8 病毒抗原检测  15
    1.9 病毒释放情况测定  15
  2 结果  15-18
  3 小结  18-19
第二部分  19-35
  1. 材料与方法  19-21
    1.1 病毒  19
    1.2 细胞  19
    1.3 病毒感染与样品收集  19-20
    1.4 芯片杂交  20
    1.5 数据分析  20-21
  2 结果  21-34
    2.1 RNA质检与芯片质量  21-22
    2.2 表达谱芯片分析概述  22-26
    2.3 差异基因的分析  26-34
  3 小结  34-35
讨论  35-38
结论  38-39
参考文献  39-43
综述  43-52
  参考文献  48-52
致谢  52

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 医学微生物学（病原细菌学、病原微生物学） > 人体病毒学（致病病毒）
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