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肺癌A549细胞上皮—间质转化及其对microRNAs表达影响的研究

作　者: 王海兵
导　师: 陈晓峰
学　校: 苏州大学
专　业: 胸外科
关键词: 上皮-间质转化(EMT) microRNA 肺癌A549细胞
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


背景和目的:在我国,肺癌已成为首位恶性肿瘤死亡原因,肺癌的侵袭转移是术后复发、患者死亡的主要原因;细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)是在特殊诱导因子的作用下,细胞由上皮型转变成间质型的过程,很多研究表明EMT在肺癌发生发展以及侵袭转移过程中起着重要作用;microRNAs(miRNAs)是一类新近发现的长度约22nt(nucleotide核苷酸)的非编码小RNA分子,通过抑制靶基因mRNA翻译或诱导靶基因mRNA降解,在转录后水平调控基因表达,已经有研究发现其可调控细胞分化、细胞增殖和肿瘤发生发展及侵袭转移等。本研究旨在探讨肺癌A549细胞上皮-间质转化(EMT)及其对microRNAs(miRNAs)表达的影响,为研究肺癌发生发展及侵袭转移的分子机制提供新思路。方法:本研究采用不同浓度的TGF-β1诱导肺癌A549细胞发生EMT;用相差显微镜观察A549细胞诱导前后的形态学变化;Western blot验证EMT相关标记蛋白表达变化;MicroRNA(miRNA)芯片技术检测EMT前后miRNAs表达变化;荧光定量RT-PCT验证芯片结果的可靠性;统计学方法:数据采用SPSS16.0统计学软件进行处理,所有的数据以均数±标准差表示,采用配对设计t检验。结果:肺癌A549细胞经TGF-β1诱导发生EMT后细胞形态拉长,细胞间连接变得疏松;肺癌A549细胞经TGF-β1诱导发生EMT后上皮型标记蛋白E-cadherin表达降低,而间质型标记蛋白Vimentin和Fibronectin表达上调;肺癌A549细胞上皮-间质转化前后MiRNA芯片结果获得51个miRNAs在诱导前后表达差异在2倍以上且有统计学意义(p<0.05),其中18个miRNAs经诱导后表达上调,33个miRNAs经诱导后表达下调,其中mir-33a和mir-193a-3p的表达经诱导后分别下调了92.8%和86.5%;荧光定量RT-PCR检测mir-33a和mir-193a-3p的表达经诱导后分别下调了73.1%和56.6%。结论:TGF-β1能够诱导肺癌A549细胞发生EMT;EMT可影响肺癌A549细胞中microRNAs的表达;microRNAs可能通过EMT调节肺癌的侵袭转移。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-10
第一章 前言  10-14
  参考文献  11-14
第二章 材料和方法  14-24
  1 实验材料、试剂及仪器  14-17
    1、1 实验材料  14
    1、2 实验试剂及溶液  14-16
    1、3 实验仪器  16-17
  2 实验方法  17-24
    2、1 肺癌A549 细胞株的培养与诱导  17-18
    2、2 Western Blot  18-20
    2、3 MiRNAs 差异表达谱（miRNAs 芯片）的制作  20-22
    2、4 荧光定量RT-PCR  22-23
    2、5 统计学分析  23-24
第三章 结果  24-35
  1. TGF-β1 诱导肺癌 A549 细胞发生形态学变化观察  24-26
  2. Western blot 检测肺癌 A549 细胞上皮型标记蛋白与间质型标记蛋白 表达变化  26-27
  3. MiRNA 芯片结果  27-31
  4、总 RNA 提取后质量检测  31-33
  5. 荧光定量 RT-PCR 验证 miRNA 表达谱芯片结果  33-35
第四章 讨论  35-37
第五章 结论  37-38
参考文献  38-40
综述1  40-51
  参考文献  46-51
综述2  51-62
  参考文献  57-62
中英文缩略词表  62-63
攻读学位期间公开发表的论文  63-64
攻读硕士学位期间参与的科研项目  64-65
致谢  65-66

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
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