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AKT1磷酸化转录因子HEB Ser~(559)位点并调控其活性的研究

作　者: 王磊
导　师: 杨晓明
学　校: 中国人民解放军军事医学科学院
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: AKT1 HEB 磷酸化 p21 SRG3 细胞增殖
分类号: Q75
类　型: 博士论文
年　份: 2011年
下　载: 33次
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内容摘要


AKT1即蛋白激酶B是PI3K/AKT信号转导通路的核心分子,具有调控物质代谢、细胞生长、分化、凋亡和迁移等多种重要的生物学功能,我们实验室前期利用串联亲和纯化联合质谱技术（ TAP-MS ）,以AKT1为诱饵从HepG2细胞中纯化鉴定出一批AKT1可能的候选相互作用蛋白质。HEB是鉴定到的AKT1候选相互作用蛋白质之一,属于bHLH转录因子家族,参与调控细胞生长和分化过程。本论文研究了AKT1与HEB的相互作用和AKT1对HEB活性的调控作用。通过免疫共沉淀、GST-pull down、共定位实验验证了HEB与AKT1之间的相互作用;采用体内体外实验证明AKT1可磷酸化HEB,证明HEB是AKT1新的底物分子;活化PI3K途径可增强HEB磷酸化,PI3K特异抑制剂可抑制胰岛素、肝细胞生长因子诱导的HEB磷酸化,表明HEB的磷酸化依赖PI3K/AKT信号通路。HEB蛋白质序列的Ser559位点在不同物种同源分子间高度保守,并符合AKT1磷酸化底物的保守氨基酸序列特征(RGRTSS559),我们推测该位点是AKT1的磷酸化位点,并得到突变体实验的验证。突变Ser559位点不改变HEB的细胞核定位,但减低了HEB上调p21表达、诱发细胞周期G0-G1期阻滞、进而导致细胞生长抑制的活性、表明该位点是HEB发挥功能的重要位点。HEB通常与转录因子E47形成异源二聚体发挥转录调控作用, Ser559位点突变导致HEB丧失了与E47发生相互作用的能力,并降低了两者协同调控SRG3启动子的活性。综上,我们的实验结果证明HEB是AKT1新的作用底物,AKT1可通过Ser559位点磷酸化HEB调控其生物学功能。

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中图分类: > 生物科学 > 分子生物学 > 分子遗传学
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