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miR-223在胰腺癌细胞中表达及对增殖、凋亡和细胞周期的影响

作　者: 邴钟兴
导　师: 赵玉沛
学　校: 北京协和医学院
专　业: 临床医学
关键词: miR-223 胰腺癌靶基因细胞增殖凋亡细胞周期
分类号: R735.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：检测miR-223在人胰腺癌细胞株中的表达情况并研究miR-223对胰腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响,探索其作用机制。方法：以实时定量PCR (real-time PCR)检测人胰腺癌细胞株中miR-223的表达情况；此后利用生物信息学方法和双荧光素酶报告基因检测系统寻找miR-223的靶基因；最后以miR-223类似物转染胰腺癌T3M4细胞,以miR-223抑制物转染胰腺癌SW1990细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖,Annexin V/PI双染法检测分析细胞凋亡,流式细胞术检测分析细胞周期变化。结果:miR-223在上述8株人胰腺癌细胞株中均有表达,其中miR-223在Panc-1、BxPC-3、 Capan-1、 COLO357、 SW1990、 MiaPaCa-2中表达相对较高,而在AsPC-1、 T3M4中表达相对较低；然后利用生物信息学方法从TargerScan Miranda、 Diana-MicroT、 PicTar等预测软件中汇总分析并筛选出候选靶基因FOXOla,双荧光素酶报告基因检测结果显示FOXOla组与阳性对照组相比相对荧光值降低,具有统计学差异(P<0.05)。在SW1990中下调miR-223的表达可以抑制胰腺癌细胞的增殖、使S期细胞比例减少,G1期、G2/M期未见规律性改变；在T3M4中上调miR-223的表达可以促进胰腺癌细胞的增殖、使S期细胞比例增加,G1期细胞比例下降,G2/M期未见规律性改变；本次实验通过上调或下调miR-223表达未观察到对胰腺癌细胞凋亡的影响。结论：miR-223在8株胰腺癌细胞株中均有表达。FOXOla直接受到miR-223调控,为miR-223靶基因。miR-223可以促使胰腺癌细胞的增殖、引起细胞周期重新分布,未观察到其对胰腺癌细胞凋亡的影响。

全文目录

缩略词表  4-5
中文摘要  5-6
Abstract  6-7
前言  7-10
第一部分 miR-223在人胰腺癌细胞株中的表达检测  10-25
  材料与方法  11-17
  实验结果  17-21
  讨论  21-24
  小结  24-25
第二部分人胰腺癌细胞株中miR-223下游靶基因的筛选  25-55
  材料与方法  26-37
  实验结果  37-50
  讨论  50-54
  小结  54-55
第三部分 miR-223对胰腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响  55-77
  材料与方法  56-61
  实验结果  61-74
  讨论  74-76
  小结  76-77
参考文献  77-84
全文结论  84-85
综述 miR-223与肿瘤关系研究进展  85-93
  参考文献  90-93
致谢  93

miR-223在胰腺癌细胞中表达及对增殖、凋亡和细胞周期的影响

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