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miR-21对胰腺癌细胞增殖、凋亡和化疗敏感性的影响及其作用机制

作　者: 东洁
导　师: 赵玉沛
学　校: 北京协和医学院
专　业: 临床医学
关键词: 胰腺癌 miR-21 细胞增殖凋亡化疗敏感性
分类号: R735.9
类　型: 博士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：研究miR-21对胰腺癌细胞生物行为学的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法：分别以miR-21类似物和miR-21抑制物转染胰腺癌MIA PaCa-2细胞,以转染无义序列组为对照,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术和Caspase3活性检测分析细胞凋亡,Western Blot法检测相关蛋白的表达,双荧光素酶报告基因的方法探索miR-21的潜在靶基因。结果：各种质粒在胰腺癌细胞系MIA PaCa-2中的转染效率约为70%左右。与转染无义序列的对照组相比,转染miR-21类似物的细胞miR-21表达明显上调,细胞增殖能力增强,凋亡比例减少,对化疗药物吉西他滨的敏感性降低。在分子层面,转染miR-21类似物组的Caspase3活性降低,bcl-2蛋白表达量增高,bax表达量降低,转染含有野生型Bcl-23’UTR区的pRL-TK质粒后,细胞海肾荧光素酶产生的荧光强度增高,而转染含突变型Bcl-23’UTR区的pRL-TK质粒后,细胞无明显改变。而miR-21抑制物组,所得结果与miR-21类似物组结果相反,即转染miR-21抑制物后,细胞增殖能力降低,凋亡比例增高,对化疗药物吉西他滨的敏感性提高。在分子层面,转染miR-21抑制物之后,Caspase3活性升高,bcl-2蛋白表达量降低,bax表达量提高,转染含有野生型Bcl-23’UTR区的pRL-TK质粒后,细胞海肾荧光素酶产生的荧光强度降低,而转染含突变型Bcl-23’UTR区的pRL-TK质粒后,细胞无明显改变。结论：miR-21通过对bcl-2家族蛋白表达的调控,促进胰腺癌细胞的增殖、抑制凋亡,并降低化疗敏感性。这种作用可能是由miR-21对bcl-23’UTR区的直接作用造成的。

全文目录

缩略词表  4-5
中文摘要  5-6
Abstract  6-8
前言  8-14
  参考文献  11-14
第一部分：胰腺癌细胞的培养和转染效率的检测  14-29
  材料与方法  15-22
  实验结果  22-26
  讨论  26-28
  参考文献  28-29
第二部分：miR-21对胰腺癌细胞增殖、凋亡和化疗敏感性的影响  29-47
  材料与方法  30-34
  实验结果  34-41
  讨论  41-45
  参考文献  45-47
第三部分：miR-21在胰腺癌细胞中的作用机制研究  47-76
  材料与方法  48-63
  实验结果  63-69
  讨论  69-74
  参考文献  74-76
小结  76-77
综述  77-87
  参考文献  81-87
致谢  87

miR-21对胰腺癌细胞增殖、凋亡和化疗敏感性的影响及其作用机制

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