学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

链霉菌FR-008与灰色链霉菌IMRU3570及其代谢产物的比较研究

作　者: 黄曦
导　师: 邓子新
学　校: 华中农业大学
专　业: 分子生物学
关键词: 七烯大环内酯 FR-008 结构分析 HPLC 氨基海藻糖 基因克隆
分类号: Q935
类　型: 博士论文
年　份: 1999年
下　载: 213次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


很多迹象表明链霉菌FR-008与灰色链霉菌IMRU3570有着十分密切的关系，它们均能产生一种抗真菌的七烯大环内酯类抗生素。本文主要从化学和生物学两个角度分析和比较了这两个菌株的异同，并对抗生素的氨基海藻糖残基基因进行了克隆尝试。 首先从大量的发酵液中提取分离了链霉菌FR-008产生的抗生素FR-008，并通过大孔树脂吸附、柱层析等手段进行了初步提纯。HPLC分析研究表明，它与灰色链霉菌IMRU3570产生的杀假丝菌素是同一种物质，均含有相同的几种主要组分。利用HPLC进一步分离提纯，获得了FR-008的4个主要组分FR-008 a，b，c，d。对这4个组分进行生物活性测试分析后发现，它们对啤酒酵母的抑制活性无显著差异。在结构分析方面，通过核磁共振技术（500兆赫），1H-1H NMR，13C NMR，对FR-008 b组分进行了结构分析，结果表明它与杀假丝菌素D是同一种化合物；另外通过对FR-008 b和FR-008 a的1H NMR的比较，提出了FR-008 a的可能结构。 对链霉菌FR-008和灰色链霉菌IMRU3570的RFLP分析发现，它们的染色体具有很高同源性；PFGE的比较研究发现，这两个菌株的明显区别是链霉菌FR-008携带有两个线性质粒，而在灰色链霉菌IMRU3570中则没有这两个线性质粒。这两个菌株染色体的VspI酶切图谱无明显差异。因此可以推测，这两个菌株在表型上的差别有可能与链霉菌FR-008中的线性质粒有直接的关系，但也不能排除染色体基因之间的差异。 利用与糖基合成有关的基因str-DE作探针对这两个菌株的总DNA进行了Southern杂交，从两个菌株的总DNA中均检测到一段相同大小的阳性片断，约6.4kd（BamHI+BglII酶切）。用这个探针，对链霉菌FR-008的基因文库进行杂交筛选，获得了3个阳性克隆，经Southern杂交分析，发现它们均含有6.4kb共同的阳性片断。由于在杂交实验中使用的是异源探针，又未用克隆的片断进行基因中断或基因置换试验，因而目前尚不能确定所克隆的糖基基因与FR-008的氨基海藻糖残基的生物合成有关。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-7
缩写(Abbreviation)  7-11
第一章 分子生物学与现代分析技术(综述)  11-21
  1-1 核磁共振  11-14
  1-2 高效液相色谱  14-15
  1-3 毛细管电泳  15-21
第二章 聚酮分子生物学进展(综述)  21-32
  2-1 简介  21
  2-2 携带PKS类型Ⅱ基因重组子的研究  21-26
    1 适合在重组PKS中构件与表达的特殊寄主-载体系统  22-23
    2 携带同源PKS基因的重组子  23-24
    3 携带杂合PKS基因位点的重组子  24-26
  2-3 模块结构的聚酮合酶  26-32
    1 几个重要的聚酮化合物  27-28
    2 程序化的模型和来自重组体的证据  28-32
第三章 链霉菌FR-008代谢产物的研究  32-63
  3-1 链霉菌FR-008的分离与检测  33-44
    1 紫外光谱与活性  33-38
      1 ) 材料与方法  33-35
      2 ) 结果与讨论  35-38
    2 抗生素FR-008的提取分离  38-44
      1 ) 材料与方法  39-40
      2 ) 结果与讨论  40-44
  3-2 抗生素FR-008的HPLC分析分离  44-52
    1 材料与方法  45-46
    2 结果与讨论  46-52
      1 ) 离子强度对分离的影响  46-48
      2 ) 流动相的选择  48-49
      3 ) 抗生素FR-008与杀假丝菌素  49-50
      4 ) 分离制备  50-51
      5 ) 链霉菌FR-008及其衍生菌株代谢产物的研究  51-52
  3-3 结构分析  52-63
    1 简介  52-54
    2 仪器与方法  54
    3 结构分析  54-63
      1 ) FR-008b的结构分析  54-59
      2 ) FR-008a结构的比较分析  59-63
第四章 链霉菌FR-008与灰色链霉菌IMRU 3570的比较及糖基的克隆研究  63-82
  1 材料与方法  64-70
  2 结果分析  70-82
    2.1 链霉菌FR-008和灰色链霉菌IMRU3570的比较研究  70-75
    2.2 糖基的克隆研究  75-82
第五章 展望  82-88
  1 链霉菌FR-008和灰色链霉菌IMRU3570的进一步比较  82
  2 抗生素FR-008各主要组分的结构分析  82-83
  3 新聚酮类抗生素的合成研究  83-88
    1 ) FR-008聚酮合酶的模块结构  83-85
    2 ) PKS重组工程中的表达系统  85
    3 ) FR-008小PKSs的重组  85-88
后记  88
致谢  88

相似论文

  1. 音乐结构自动分析研究,TN912.3
  2. 红肉脐橙和‘国庆四号’温州蜜柑中CHS和CHI基因的克隆与表达及其对类黄酮积累的调控机制,S666.4
  3. 军曹鱼生长激素基因（GH）的克隆和表达,Q786
  4. 消癌平制剂及其绿原酸单体的药动学研究与质量控制,R285
  5. 柔性、刚性混配配合物的合成与性质表征,O621.1
  6. 食品接触材料中双酚A的快速测定方法研究,TS206.4
  7. 地黄内生菌的分离鉴定和产梓醇菌株的筛选及其发酵研究,TQ461
  8. Pseudomonas sp.RT-1低温脂肪酶发酵条件优化、纯化及基因的克隆表达,TQ925
  9. 海水珍珠染色机理及染色工艺优化研究,TS933.23
  10. 红笛鲷清道夫受体B型Ⅰ类和抗冻蛋白Ⅱ型基因的克隆、表达与定量分析,S917.4
  11. 棉铃虫NADPH-细胞色素P450还原酶基因的克隆、时空表达及RNA干扰,S435.622.3
  12. 硅、硫对水稻砷吸收、积累的影响机制研究,S511
  13. 广义系统的结构分析及控制方法研究,N945.1
  14. 多菌灵降解菌的分离鉴定、生物学特性及多菌灵水解酶基因的克隆和表达研究,X172
  15. 烟草中NAC类转录因子基因的克隆与分析,Q943.2
  16. 氰氟草酯降解菌分离鉴定、降解特性的研究及氰氟草酯水解酶基因（chbH）的克隆和表达,X172
  17. 腐生葡萄球菌M36耐有机溶剂脂肪酶基因的克隆与表达,Q78
  18. 红曲霉洛伐他汀生物合成相关基因克隆与分析,TQ927
  19. 产酶溶杆菌OH11菌株胞外酶调控相关基因ctp的克隆及功能分析,TQ925
  20. α-半乳糖苷酶高产菌株的筛选及其基因的克隆、表达、纯化和性质研究,TQ925
  21. 茶叶中有效生化成分高效液相色谱检测法的建立及其在凤凰乌龙茶检测中的应用,TS272.7

中图分类: > 生物科学 > 微生物学 > 微生物生理学
© 2012 www.xueweilunwen.com