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常绿灌木沙冬青四个低温、干旱胁迫诱导基因功能研究

作　者: 史军娜
导　师: 卢存福
学　校: 北京林业大学
专　业: 生化与分子生物学
关键词: 沙冬青 AmRRM AmZFPG AmSTZF AmCaM
分类号: Q943.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 62次
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内容摘要


本论文研究低温、干旱胁迫沙冬青EST库中RNA结合蛋白基因AmRRM,锌指蛋白基因AmZFPG和AmSTZF,钙调素基因AmCaM的功能。首先,对这四个基因分别进行了生物信息学分析,包括cDNA序列、氨基酸性质、蛋白质的保守性、进化关系和蛋白质结构的分析及亚细胞定位和功能的预测,初步判断这些基因是与胁迫响应相关的基因。其次,采用RT-PCR的方法检测低温和干旱处理条件下的沙冬青叶片中这四个基因的表达。结果表明这四个基因的表达是与低温、干旱胁迫相关的。为了进一步研究基因的功能,将这四个基因构建到原核表达载体pet30a上,转入大肠杆菌BL21,诱导表达目的蛋白。经SDS-PAGE电泳检测,证明AmRRM和AmCaM基因在大肠杆菌中能够表达融合蛋白。在此基础上,用AmRRM蛋白制备抗体,western blotting检测AmRRM基因在植物中的表达。同时,将AmRRM、AmZFPG、AmSTZF三个基因构建到真核表达载体2300上。转入农杆菌LBA4404,用叶盘侵染法转化野生型烟草。将野生型和转基因植株在低温(4℃)处理,测定转基因植株和野生型植株电导率。初步实验结果显示,转基因的烟草比野生型烟草表现出更强的抗寒性,推断AmRRM、AmZFPG、AmSTZF这三个基因具有提高植物抗寒性的功能。

全文目录


摘要  3-4
ABSTRACT  4-5
目录  5-7
1 引言  7-17
  1. IRNA结合蛋白基因研究进展  7-9
    1.1.1 RNA结合蛋白的结构功能  7
    1.1.2 RNA结合蛋白的作用机理  7-8
    1.1.3 RNA结合蛋白在植物抗逆方面的研究  8-9
  1.2 锌指蛋白及其在植物抗逆方面的研究进展  9-12
    1.2.1 锌指蛋白的结构功能  9-10
    1.2.2 锌指蛋白的作用机理  10-11
    1.2.3 锌指蛋白在植物抗逆方面的研究  11-12
  1.3 钙调素蛋白及其在植物抗逆方面的研究进展  12-15
    1.3.1 钙调素蛋白的结构功能  12-14
    1.3.2 钙调素蛋白的作用机理  14
    1.3.3 钙调素蛋白在植物抗逆方面的研究  14-15
  1.4 沙冬青  15
  1.5 本研究的目的意义  15-17
2 沙冬青AmRRM功能研究  17-39
  2.1 实验材料  17
  2.2 实验方法  17-21
    2.2.1 生物信息学分析  17
    2.2.2 RT-PCR分析  17-18
    2.2.3 原核表达载体的构建  18-21
    2.2.4 真核表达载体的构建  21
  2.3 实验结果与分析  21-37
    2.3.1 AmRRM生物信息学分析  21-24
    2.3.2 AmRRM在沙冬青胁迫处理叶片中的表达  24-26
    2.3.3 AmRRM原核表达  26-30
    2.3.4 AmRRM真核表达  30-37
  2.4 讨论  37-39
3 沙冬青AmZFPG功能研究  39-53
  3.1 实验材料  39
  3.2 实验方法  39
  3.3 实验结果与分析  39-51
    3.3.1 AmZFPG生物信息学分析  39-41
    3.3.2 AmZFPG在沙冬青胁迫处理叶片中的表达  41-43
    3.3.3 AmZFPG原核表达  43-47
    3.3.4 AmZFPG真核表达  47-51
  3.4 讨论  51-53
4 沙冬青AmSTZF的功能研究  53-69
  4.1 实验材料  53
  4.2 实验方法  53
  4.3 实验结果与分析  53-66
    4.3.1 生物信息学分析  53-57
    4.3.2 AmSTZF在沙冬青胁迫处理叶片中的表达  57-59
    4.3.3 AmSTZF原核表达  59-63
    4.3.4 AmSTZF真核表达  63-66
  4.4 讨论  66-69
5 沙冬青AmCaM功能研究  69-79
  5.1 实验材料  69
  5.2 实验方法  69
  5.3 实验结果与分析  69-78
    5.3.1 生物信息学分析  69-70
    5.3.2 AmCaM在沙冬青胁迫处理叶片中的表达  70-72
    5.3.3 AmCaM原核表达  72-78
  5.4 讨论  78-79
6 总结与进一步研究设想  79-81
  6.1 总结  79
  6.2 进一步研究计划  79-81
参考文献  81-87
个人简介  87-89
导师简介  89-91
致谢  91

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中图分类: > 生物科学 > 植物学 > 植物细胞遗传学 > 植物基因工程
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