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嵌合体杯状病毒的构建及FCV抗原表位的表达研究

作　者: 王延树
导　师: 宣华
学　校: 吉林大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 猫杯状病毒兔出血症病毒嵌合体病毒 ELISA
分类号: S852.65
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

兔出血症是1984年最早发生于我国的一种对家兔及野兔危害极大的烈性传染病。目前已遍及世界各地,对养兔业造成了极大的损失。为了制备RHDV的疫苗,本试验用同是杯状病毒科的猫杯状病毒作为载体,插入兔出血症病毒的主要衣壳蛋白编码基因,以期用猫杯状病毒在细胞上可以培养的特性,表达出兔出血热病毒的衣壳蛋白,使它组装成病毒空衣壳。构建了重组质粒pUC-FCVm-VP60,用限制性内切酶将质粒线性化,用体外转录试剂盒将DNA转化成RNA,用脂质体转染试剂盒将其转染到细胞内进行表达。同时为研究猫杯状病毒的保护性抗原位点,本试验还表达了猫杯状病毒的主要保护位点,构建重组表达质粒pET-FCV,在表达菌中获得了表达,利用原核表达的融合蛋白为包被抗原建立了检测抗猫杯状病毒血清抗体的间接ELISA方法。结果表明:(1)获得了兔出血症病毒衣壳编码基因正向插入猫杯状病毒的重组质粒pUC-FCVm-VP60。(2)以猫杯状病毒为载体表达了兔出血症病毒的VP60,为探索杯状病毒载体和兔出血症的免疫打下坚实的基础。(3)构建了原核表达质粒载体pET-FCV,并获得了在E.coli中的表达产物,表达量为20%。经Western blotting检测具有一定的反应原性。(3)初步建立了基于重组蛋白的猫杯状病毒血清抗体的间接ELISA检测方法

全文目录

内容提要  4-7
前言  7-10
第一篇文献综述  10-38
  第一章兔出血症病毒研究概况  10-27
  第二章猫杯状病毒的分子生物学研究进展  27-38
第二篇研究内容  38-76
  第一章重组杯状病毒转移载体的构建  38-51
    1 材料与方法  38-46
    2 结果  46-49
    3 讨论  49-50
    4 小结  50-51
  第二章嵌合体杯状病毒在F81 细胞中的表达  51-60
    1 材料与方法  51-56
    2 结果  56-57
    3 讨论  57-59
    4 小结  59-60
  第三章 FCV 主要保护性抗原基因在大肠杆菌中的表达以及间接ELISA检测方法的建立  60-76
    1 材料与方法  60-68
    2 结果  68-73
    3 讨论  73-75
    4 小结  75-76
结论  76-77
参考文献  77-88
附录  88-89
中文摘要  89-91
英文摘要  91-93
致谢  93-94
导师简介  94-95
作者简介  95

嵌合体杯状病毒的构建及FCV抗原表位的表达研究

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