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延边黄牛D型魏氏梭菌病间接ELISA诊断方法的建立

作　者: 张营
导　师: 金鑫
学　校: 延边大学
专　业: 预防兽医学
关键词: D型魏氏梭菌菌体抗原间接ELISA
分类号: S858.23
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 99次
引　用: 1次
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内容摘要

魏氏梭菌是一种梭状芽孢属条件性致病菌，该病广泛分布于自然界，是肠道中的常在菌群之一。在一定条件下，可引起机体严重的疾病。延边地区是魏氏梭菌病的高发区，尤其对延边黄牛的危害极为严重。而针对该病的检测尚无一套完整的血清学技术，因此，本研究将提取的D型魏氏梭菌制成菌体抗原，并建立了检测该病的间接ELISA方法。本实验对间接ELISA的反应条件进行了摸索，确定了最适工作条件。结果表明，美国Costar公司生产的酶标板的变异系数为4.5％，达到间接ELISA的要求；D型魏氏梭菌菌体裂解抗原最适包被浓度为50μg／ml，最适包被条件为37℃1h；被检血清的最适稀释度为1：100，酶标二抗的最适工作浓度为1：1000，血清与酶标二抗的反应时间均为37℃1h；最适封闭时间为37℃1h；PBST稀释液中脱脂乳的浓度为3％；底物最适反应条件为室温25min；阴阳性临界值为0.032。经特异性试验和重复性试验，表明建立的间接ELISA方法是特异的，且重复性好；对采集于延边地区的100份牛血清样品进行间接ELISA检测，结果阳性率为11％。本试验应用D型魏氏梭菌菌体裂解抗原为抗原，成功建立了一种检测延边黄牛血清中D型魏氏梭菌抗体的间接ELISA诊断方法，为延边黄牛D型魏氏梭菌疾病免疫监测和血清学调查提供了一种快捷、敏感、特异的血清学诊断方法。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-9
前言  9-16
  1 病原体  9-10
  2 毒素  10-11
  3 流行病学  11
  4 临床症状  11
  5 病理变化  11-12
  6 魏氏梭菌对人的危害  12
  7 诊断方法  12-14
  8 防治措施  14-15
  9 本课题研究的目的和意义  15-16
1 材料  16-19
  1.1 制备抗原所用试剂  16
  1.2 间接ELISA所用试剂  16-17
  1.3 主要仪器  17-18
  1.4 试验用抗原及血清  18-19
2 方法  19-23
  2.1 D型魏氏梭菌菌体裂解抗原制备  19
  2.2 间接ELISA方法的建立  19-21
  2.3 间接ELISA方法特异性和重复性试验  21-22
  2.4 间接ELISA方法与琼脂扩散方法的比较试验  22
  2.5 现地血清样品的检测  22-23
结果  23-33
  1 D型魏氏梭菌菌体裂解抗原的制备  23
  2 间接ELISA方法的建立  23-30
    2.1 反应板均一性的测定  23
    2.2 抗原最适包被浓度及阴阳性血清最适稀释度的确定  23-24
    2.3 抗原的最适包被温度及最适包被时间的确定  24-25
    2.4 血清最适作用时间的确定  25-27
    2.5 酶标二抗最适工作浓度及最适作用时间的确定  27
    2.6 PBST稀释液中封闭液浓度的确定  27-28
    2.7 底物最适显色时间的确定  28-29
    2.8 间接ELISA方法阴阳性临界值的确定  29-30
  3 间接ELISA方法的特异性和重复性试验  30-31
    3.1 特异性试验  30
    3.2 板内重复性试验  30
    3.3 板间重复性试验  30-31
  4 间接ELISA方法与琼脂扩散方法的比较试验  31
  5 现地血清样品的检测  31-33
讨论  33-37
  1 各种条件对间接LEISA的影响  33-34
  2 间接LEISA实验的特异性  34-35
  3 间接LEISA实验的敏感性  35-37
参考文献  37-43
致谢  43-44
个人简介  44

延边黄牛D型魏氏梭菌病间接ELISA诊断方法的建立

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