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SV40T介导的SD大鼠胰岛细胞永生化的实验研究

作　者: 韩猛
导　师: 周平；陈实
学　校: 华中科技大学
专　业: 外科学
关键词: SV40T SD大鼠胰岛细胞细胞培养永生化
分类号: R587.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的建立永生化SD大鼠胰岛细胞系。方法采用预冷的胶原酶V经胆总管进行原位逆行灌注,以Ficoll400不连续密度梯度离心法分离SD大鼠原代胰岛细胞,分别以AO/PI(丫啶橙/碘化丙啶)荧光染色法和双硫腙染色检测胰岛活性和纯度,体外葡萄糖刺激胰岛素释放试验检测胰岛功能。连续转染永生化基因SV40T三天(含有该基因的包装细胞由日本冈山大学医学院naoya kobayashi教授惠赠),使用潮霉素连续筛选一周。筛选后的胰岛细胞进行挑选并单克隆培养,随后分别用RT-PCR及western-blot对筛选后的胰岛细胞进行mRNA水平和蛋白水平分析并再次体外实验检测胰岛细胞功能。结果本实验采用SV40T基因转染SD大鼠胰岛细胞,经过潮霉素筛选后,所获得的胰岛保持原代胰岛细胞形态并可进行传代培养(目前已传30代)。RT-PCR检测到SV40T mRNA及胰岛细胞特异性转录因子PDX-1,Nkx6.1及insulin的表达。western-blot检测到SV40T蛋白的表达。体外葡萄糖刺激胰岛素释放实验显示该胰岛细胞株功能良好。结论成功的构建了永生化SD大鼠胰岛细胞系。

全文目录

中文摘要  5-6
英文摘要  6-7
前言  7-9
材料与方法  9-16
结果  16-19
讨论  19-21
结论  21-22
参考文献  22-24
综述  24-35
  参考文献  31-35
致谢  35

SV40T介导的SD大鼠胰岛细胞永生化的实验研究

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