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食品中残留醋酸甲羟孕酮酶免疫检测方法研究

作　者: 郭金花
导　师: 金征宇
学　校: 江南大学
专　业: 动物营养与饲料科学
关键词: 兽药残留醋酸甲羟孕酮半抗原混合酸酐法 ELISA
分类号: S859.84
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 130次
引　用: 1次
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内容摘要

本论文旨在开发快速检测醋酸甲羟孕酮(MPA)的ELISA试剂盒。先将肟化后的MPA分别与牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)和卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)通过混合酸酐法交联,制备成免疫抗原MPA-BSA和包被抗原MPA-OVA。再将得到的免疫原MPA-BSA按免疫程序免疫新西兰白兔4只,5次免疫后发现其中一只兔子产生的抗血清效价达到6400。然后以此抗血清为基础设计了间接竞争ELISA方法,并优化稀释缓冲液、pH、竞争时间等实验条件确定最终的ELISA检测系统。本论文研制试剂盒的IC50为4.95ng/mL,线性范围为0～100ng/mL。通过灵敏度、精密度、准确度和特异性等指标来评估此检测方法,最低检测限范围在0.1～0.3ng/mL之间,除对甲地孕酮的交叉反应率为4.2%外,对其他结构类似物的交叉反应率≤0.1%,并且标准和样品的重复性的批内变异系数小于15%,批间变异系数小于20%。本论文以1ng/g和5ng/g两个浓度分别添加到样品中测定回收率,尿样和牛奶需经过离心、稀释基质方法进行测定,肌肉组织则需要乙酸乙酯先抽提再皂化去脂的方法进行测定,所得回收率范围在40～110%,变异系数小于15%。最后将本试剂盒与荷兰EURO-DIAGNOSTICA公司的试剂盒进行比较,回收率、变异系数等结果基本一致,与GC-MS方法比较,检测结果较接近。本论文研制的ELISA试剂盒的各项参数都达到了国外试剂盒的指标和要求,可用于实际检测。

全文目录

摘要  3-4
ABSTRACT  4-5
第一章绪论  5-14
  1.1 醋酸甲羟孕酮概论  6-7
  1.2 MPA 的残留与危害  7-8
  1.3 MPA 残留的分析检测技术  8-12
  1.4 本课题研究内容、目标  12-14
第二章醋酸甲羟孕酮免疫原的合成与鉴定  14-22
  2.1 实验材料  14-15
  2.2 实验方法  15-16
  2.3 结果  16-19
  2.4 讨论  19-21
  2.5 本章小结  21-22
第三章抗醋酸甲羟孕酮抗体的制备与鉴定  22-30
  3.1 实验材料  22-23
  3.2 实验方法  23-25
  3.3 结果  25-28
  3.4 讨论  28-29
  3.5 本章小结  29-30
第四章 MPA 残留检测的ELISA 试剂盒的研制  30-47
  4.1 实验材料  30-31
  4.2 实验方法  31-34
  4.3 结果  34-43
  4.4 讨论  43-45
  4.5 本章小结  45-47
主要结论  47-48
致谢  48-49
参考文献  49-53
研究生阶段发表的论文  53

食品中残留醋酸甲羟孕酮酶免疫检测方法研究

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