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塞来昔布对人结肠癌细胞系HT-29 MicroRNA表达谱的影响及其机制的实验研究

作　者: 叶玉兰
导　师: 陈卫昌
学　校: 苏州大学
专　业: 消化内科学
关键词: 塞来昔布结肠癌 microRNA 靶基因
分类号: R735.35
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的研究塞来昔布对人结肠癌细胞系HT-29的生长抑制作用及其对HT-29细胞microRNA（miRNA）表达谱的影响。方法采用CCK-8比色还原法观察塞来昔布对HT-29细胞的生长抑制作用;计算其半数抑制浓度（IC50）,以IC50浓度作用于HT-29细胞48 h后,提取总RNA,采用illumina microRNA芯片技术检测microRNA的表达变化,采用实时定量PCR技术对芯片检测结果进行验证。选取经miRNA芯片筛选得到溶媒对照组和塞来昔布药物干预组差异表达miNRAs,三个靶基因预测软件（miRNAs,RNAHybrid,Targetscan）预测这些差异表达miNRAs的靶基因,结果取可信度较高的前100个结果的并集,并对特异性靶基因进行enrichment分析和pathway分析。结果塞来昔布对HT-29细胞有显著的生长抑制作用,且呈剂量-时间效应关系,其半数抑制浓度为237.73±1.65μmol/L;塞来昔布作用于HT-29细胞48 h后,获得28个与塞来昔布干预相关的microRNAs,其中高表达有20个(HS₁88,HS₂03,HS₂2.1,HS₂43.1,HS₄3.1,hsa-let-7f-1*,hsa-let-7i*,hsa-miR-129-3p,hsa-miR-1303,hsa-miR-141 , hsa-miR-142-5p , hsa-miR-301a , hsa-miR-30c-1* , hsa-miR-33b ,hsa-miR-570,hsa-miR-647,hsa-miR-886-3p,solexa-2526-361,solexa-499-2217,solexa-826-1288,低表达8个（HS₅8,hsa-miR-1244,hsa-miR-1268,hsa-miR-26a-1*,hsa-miR-552,hsa-miR-622,solexa-3044-295,solexa-603-1846）,经实时定量PCR验证miR-26a-1*、miR-142-5P,其表达与芯片结果一致。对其差异表达miNRAs进行靶基因的预测,发现每个miRNA可调控多个靶基因,对特异性靶基因进行enrichment分析和GeneGo通路分析。提示hsa-miR-570的靶基因参与的通路中可能性最大是WNT通路,其调控的靶基因是该通路中的核心分子。结论塞来昔布对microRNA表达谱的影响可能是其抑制HT-29细胞株生长的作用途径之一,其差异性microRNA调控的靶基因参与的相关通路可能是其抑制HT-29细胞株生长的具体分子机制之一。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
序言  9-14
  参考文献  11-14
第一部分塞来昔布对人结肠癌细胞系 HT-29 生长的影响  14-22
  材料与方法  14-16
  结果  16-18
  讨论  18-19
  参考文献  19-22
第二部分塞来昔布对人结肠癌细胞系HT-29 microRNA 表达谱的影响  22-34
  材料与方法  22-25
  结果  25-30
  讨论  30-31
  参考文献  31-34
第三部分差异表达microRNA 的靶基因生物信息学分析  34-46
  材料和方法  34-35
  结果  35-41
  讨论  41-43
  参考文献  43-46
结论  46-47
综述  47-60
  参考文献  54-60
缩略词表  60-61
攻读学位期间公开发表或待发表文章  61-62
致谢  62-63

塞来昔布对人结肠癌细胞系HT-29 MicroRNA表达谱的影响及其机制的实验研究

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