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MiR151和RhoGDIA在胃癌中的表达及意义

作　者: 谢旭祥
导　师: 赵华
学　校: 中南大学
专　业: 外科学
关键词: 胃腺癌 MicroRNA-151 RhoGDIA Real time-PCR
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：胃癌是常见的恶性肿瘤之一,发病率和死亡率均较高,目前治疗效果仍不理想。在分子水平上探讨胃癌的转移机制有助于提供胃癌治疗的新途径。microRNA(miRNA)是近年来得以发现的一类广泛存在于动植物体内的非编码小RNA,在转录后水平负性调控基因的表达。现已发现若干microRNAs直接参与胃癌的转移,microRNAs表达谱与胃癌的分期、进展和预后等密切相关。Rho家族(ras homologus oncogenes)包括RhoA、RhoB、RhoC等。RhoA在许多癌组织中过表达,而且与肿瘤的转移密切相关。而基因RhoGDI a(Rho GDPdissociation inhibitor)被认为是RhoGTPases的负性调节因子,它与GDP形式的Rho结合,使其滞留于胞浆中,阻止其与膜上的GTP结合,从而抑制Rho的活性。本文旨在研究探讨miR-151-5p和RhoGDIa在胃腺癌组织及癌旁远端相对正常组织中的表达及临床意义。观察在体外胃腺癌细胞中转染miR-151后靶基因RhoGDIa的蛋白表达量及基因RhoGDIa调控的CDC42和RhoA蛋白的表达量,从而为胃癌的发展转移提供新的研究途径。材料和方法：收集2010年6月至2010年12月湘雅二医院胃肠外科胃腺癌手术切除标本共32例,每例均以相对应的胃腺癌远端组织做对照,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测胃癌组织及相对应胃癌远端组织miR-151-5p及miR-151-3p的表达,并用免疫组化检测RhoGDIA蛋白的表达。同时利用合成的miR-151-5p及miR-151-5p抑制物以及与miR-151-3p及miR-151-3p抑制物转染胃腺癌细胞株,通过蛋白印迹法(Western blot)检测靶基因RhoGDIA蛋白的表达量的差异、RhoGDIA靶基因CDC42和RhoA蛋白的表达量的差异。结果：miR-151-5p在胃癌中的表达明显高于在癌旁正常上皮组织中的表达(P<0.05)；miR-151-3p在胃癌中的表达与在癌旁正常上皮组织中的表达无显著差异(P>0.05)；RhoGDIA蛋白在胃正常上皮组织中的表达高于在癌组织中的表达；miR-151-5p和RhoGDIA蛋白的表达与患者性别、年龄、肿瘤浸润深度无显著相关(P>0.05)；miR-151-5p表达与胃癌的分化程度相关,分化越差,miR-151-5p的表达水平越高,有淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组(P<0.05),且随着临床分期增高而增加,Ⅲ-Ⅳ期明显高于Ⅰ-Ⅱ期(P<0.05)；RhoGDIA表达与胃癌的分化程度相关,分化越差,RhoGDIA蛋白的表达越低,有淋巴结转移组明显低于无淋巴结转移组(P<0.05),且随着临床分期增高而表达下调,Ⅲ-Ⅳ期明显低于Ⅰ-Ⅱ期(P<0.05)；在胃腺癌MGC803细胞转染miR-151-5p mimics后RhoGDIA下调,CDC42和RhoA上调,相反转染miR-151-5p inhibitors结果相反。在MGC803细胞转染合成的miR-151-3p或抑制物后RhoGDIA表达无明显变化。结论：(1)miR-151-5p在胃癌组织中高表达,与胃癌患者性别、年龄、肿瘤浸润深度无关,但与胃癌患者淋巴结转移及临床分期有关；(2)RhoGDIA是由miR-151-5p的靶向调节而不是miR-151-3p。

全文目录


中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
英文缩略词表  10-12
前言  12-13
第一部分  13-25
  材料  13-14
  主要实验仪器和耗材  14-15
  主要试剂  15
  方法  15-18
  统计分析  18
  结果  18-25
第二部分  25-35
  前言  25
  材料  25-26
  方法  26-32
  讨论  32-35
全文总结  35-36
  1 结论  35
  2 本研究的意义及存在的问题  35
  3 后续工作  35-36
参考文献  36-39
综述  39-51
  参考文献  46-51
致谢  51

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
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