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羟基喜树碱诱导口腔鳞癌细胞内质网应激反应性凋亡的实验研究

作　者: 张巍峰
导　师: 张彬
学　校: 泰山医学院
专　业: 外科学
关键词: 羟基喜树碱口腔鳞状细胞癌细胞凋亡内质网应激 GRP78
分类号: R739.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

目的：研究羟基喜树碱能否通过内质网应激诱导口腔鳞癌细胞凋亡。方法：体外培养人口腔鳞癌细胞株-KB细胞,取处于对数生长期的细胞进行实验,不同实验方法根据羟基喜树碱浓度采用不同分组方式。KB细胞经羟基喜树碱处理后,利用MTT试验检测羟基喜树碱的细胞毒性作用,计算羟基喜树碱对KB细胞的生长抑制率和半抑制浓度(IC50),并绘制生长抑制曲线。Hoechst 33258染色和流式细胞术分别对细胞凋亡进行定性和定量研究,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Caspase-3和Bcl-2蛋白以及内质网特异蛋白GRP78蛋白的表达情况,免疫荧光细胞化学检测GRP78蛋白在细胞中的定位和转位情况。数据均以x±s表示,利用SPSS10.0进行单因素方差分析。结果：羟基喜树碱对KB细胞具有细胞毒性作用,随羟基喜树碱浓度的升高毒性作用逐渐增强,24h和48h羟基喜树碱的IC50分别为2.43μg/ml和0.072μg/ml。Hoechst 33258染色后,对照组细胞核多呈圆形或椭圆形,可见少量核分裂象,实验组细胞核着色程度不一,可见典型凋亡细胞核型,胞核呈致密固缩或碎块状浓染。羟基喜树碱作用于KB细胞48h后,随其浓度的升高,各组细胞凋亡率逐渐升高,Western Blot结果提示Caspase-3蛋白和GRP78蛋白表达增高,Bcl-2蛋白表达降低,实验组与对照组相比较均有显著性差异(P<0.05)。正常情况下,GRP78蛋白表达定位于KB细胞的胞浆,部分区域浓聚。KB细胞经羟基喜树碱刺激后,GRP78蛋白开始出现胞浆高表达,随着药物浓度的升高,逐渐向核周浓聚,最后定位于细胞核。结论：1、羟基喜树碱对口腔鳞癌细胞具有细胞毒性,呈剂量依赖关系。2、羟基喜树碱能诱导口腔鳞癌细胞凋亡。3、羟基喜树碱诱导口腔鳞癌细胞凋亡过程中Caspase-3蛋白表达增高、Bcl-2蛋白表达下降。4、内质网应激参与羟基喜树碱诱导口腔鳞癌细胞凋亡的过程。5、GRP78蛋白在内质网应激介导细胞凋亡过程中的真正作用有待于进一步研究。

全文目录

中文摘要  3-5
英文摘要  5-7
符号说明  7-9
第一部分羟基喜树碱诱导口腔鳞癌细胞凋亡的实验研究  9-26
  前言  9-11
  材料与方法  11-20
  统计学处理  20-21
  结果  21-23
  讨论  23-25
  结论  25-26
第二部分羟基喜树碱诱导KB细胞内质网应激反应性凋亡的实验研究  26-34
  前言  26-29
  材料与方法  29
  统计学处理  29-30
  结果  30-31
  讨论  31-33
  结论  33-34
附图表  34-38
参考文献  38-43
综述  43-50
  参考文献  47-50
致谢  50-51
攻读学位期间发表的学术论文目录  51-52

羟基喜树碱诱导口腔鳞癌细胞内质网应激反应性凋亡的实验研究

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