学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

苦荞过敏蛋白C端结构域的原核表达及其免疫学活性的鉴定

作　者: 王岚
导　师: 王转花
学　校: 山西大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 苦荞麦 过敏原 TBa 抗原表位
分类号: Q943.2;S517
类　型: 硕士论文
年　份: 2006年
下　载: 77次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


荞麦（Fagopyrum esculentum）作为一种功能性食物,越来越受到人们的广泛关注。它不仅具有丰富的营养价值,而且还有很高的药用价值。荞麦蛋白由较为独特的氨基酸组成。许多实验表明荞麦中的黄酮类物质含量较高,其产品具有明显的降低胆固醇和降血压等生物学作用,而且对糖尿病也有一定的疗效。然而,近年来的研究发现,荞麦中含有的过敏性成分通常可使接触或食用它的人产生过敏症状。日本和韩国学者先后从甜荞麦中分离获得16kDa、22-24 kDa、34-38 kDa及69 kDa等分子量不等的过敏蛋白。虽然对荞麦主要过敏原的确定还没有得到统一,各个研究小组的报道也存在一些差异,但一般认为22-24 kDa蛋白是荞麦中的主要过敏原。目前,国内外关于苦荞麦过敏的研究较少。本实验室曾以我国云南苦荞种子为原料,经分离纯化获得纯度均一的24 kDa天然蛋白,命名为TBa（tartary buckwheat allergen）,通过免疫学检测发现其为苦荞中的主要过敏原。之后采用基因克隆法首次获得该苦荞过敏原的结构基因序列,并于2002年在GenBank登录（登录号为AY044918）。 本实验是在已获得TBa结构基因的基础上,进行TBa的原核表达。首先将该基因克隆到原核表达载体pET-28a上,后将重组质粒转入大肠杆菌BL21（DE3）中进行表达。结果表达产物大部分以包涵体的形式存在,进一步经Ni2+-NTA琼脂糖柱亲和纯化,得到纯度达95%以上的目的蛋白。用透析复性的方法将目的蛋白复性,复性产率达到约68%。Westernblot证实目的蛋白N端带有6个组氨酸标签。ELISA检测表明目的蛋白与IgE有特异性的结合,具有较高的免疫学活性。 根据TBa的结构基因序列推导出该蛋白的氨基酸编码序列,应用Antigenic程序对推导出来的氨基酸序列进行抗原表位预测。初步的预测结果表明在成熟的TBa分子中包含八个抗原表位区段。选择含有抗原决定簇可能性最大的两个区段,根据其碱基序列,设计引物,克隆获得两个表位的基因片段。分别将两个基因片段连接到原核表达载体pET-32a上,并将重组质粒转入大肠杆菌BL21（DE3）中进行表达。对分离纯化后的表达产物进行免疫活性鉴定,初步表明两个推测的抗原表位区段均具有一定的抗体结合活性。

全文目录


摘要  8-10
ABSTRACT  10-13
第一章 文献综述  13-27
  1. 食物过敏性的分类与机理  13-14
  2. 食物过敏原  14-16
    2.1 植物性食物过敏原  14-15
    2.2 动物性食物过敏原  15
    2.3 转基因食物过敏原  15-16
  3. 食物过敏及其诊断、治疗手段的研究进展  16-22
    3.1 食物过敏症  16-17
    3.2 食物过敏原检测方法  17-18
    3.3 食物过敏预防  18-19
    3.4 过敏疾病的治疗  19-22
  4. 荞麦过敏研究进展  22-25
    4.1 荞麦过敏症  22-23
    4.2 荞麦中导致过敏反应的主要抗原鉴定及性质研究  23-25
  5. 展望  25-27
第二章 苦荞过敏蛋白C端结构域TBa原核表达载体的构建  27-34
  1 材料  27-28
    1.1 菌株和质粒  27
    1.2 主要的工具酶及试剂  27-28
    1.3 寡聚核苷酸  28
    1.4 核酸电泳及相关试剂  28
    1.5 主要实验仪器  28
  2 方法  28-31
    2.1 重组质粒pET-28a-TBa的构建  28-31
  3 结果  31-32
    3.1 PCR扩增TBa结构基因  31
    3.2 重组pGEM-T-TBa的筛选与鉴定  31-32
    3.3 重组质粒pET-28a-TBa的构建与鉴定  32
  4 讨论  32-34
第三章 苦荞过敏蛋白C端结构域TBa的原核表达及免疫学活性的初步鉴定  34-42
  1 材料  34-35
    1.1 菌株与质粒  34
    1.2 主要试剂  34-35
    1.3 主要实验仪器  35
  2 方法  35-38
    2.1 E.coli BL21/pET-28a-TBa的诱导表达  35-37
    2.2 包涵体分离纯化  37
    2.3 包涵体的透析复性  37
    2.4 重组TBa的免疫学活性鉴定  37-38
  3 结果  38-41
    3.1 E.coli BL21/pET-28a-TBa的诱导表达及Western blot鉴定  38-39
    3.2 包涵体的分离与纯化  39-40
    3.3 包涵体的透析复性  40
    3.4 重组TBa的免疫学活性鉴定  40-41
  4 讨论  41-42
第四章 苦荞过敏蛋白C端结构域抗原表位的初步研究  42-51
  1 材料  42-44
    1.1 菌株和质粒  42
    1.2 主要试剂  42-43
    1.3 寡聚核苷酸  43
    1.4 主要试剂的配制  43-44
  2 方法  44-46
    2.1 表位预测  44
    2.2 重组质粒pET-32a-E1，pET-32a-E2的构建  44-45
    2.3 E.coli BL21/pET-32a-TBa、E.coli BL21/pET-32a-E1和E.coli BL21/pET-32a-E2的诱导表达  45-46
  3 结果  46-50
    3.1 重组质粒pET-32a-E1、pET-32a-E2的构建  46-48
    3.2 E.coli BL21/pET-32a-TBa、E.coli BL21/pET-32a-E1、E.coli BL21/pET-32a-E2的诱导表达  48-50
  4 讨论  50-51
第五章 小结及展望  51-52
  1 小结  51
  2 展望  51-52
参考文献  52-58
致谢  58-59
附录  59-60

相似论文

  1. HSV-2gD模拟抗原表位P6、HBsAg、IL18重组核酸疫苗的构建及免疫效果观察,R392
  2. 猪圆环病毒2型Cap蛋白单克隆抗体的制备与鉴定,S852.65
  3. 过敏原TBb抗原表位区及其关键氨基酸的鉴定,R284.1
  4. 抗人CD40单抗5C11抗原识别表位的初步研究,R392
  5. 拟穴青蟹过敏原的性质研究,S917.4
  6. 不同年龄段儿童过敏性紫癜的血清特异性IgE抗体的检测与分析,R446.6
  7. 中医病因风邪与过敏原的相关性研究,R2-03
  8. 杂粮复合肉制品的研制及品质特性研究,TS251.7
  9. 苦荞过敏原TBa的定点突变及免疫活性研究,S517
  10. IBDV-VP2多表位串联基因的原核表达及表达产物免疫原性分析,S852.65
  11. H5N1亚型禽流感病HA蛋白抗原表位预测与筛选,Q789
  12. 鸡传染性支气管炎病毒M蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定,S858.31
  13. A族链球菌表面蛋白Fba单克隆抗体对应表位的鉴定及研究,R392
  14. 海产品过敏原免疫芯片检测方法的研究,TS254.7
  15. 铝胁迫对细胞壁果胶的影响以及一氧化氮、生长素在铝诱导草酸分泌中的作用,Q945
  16. 乳化型香肠中脂肪氧化及控制的研究,TS251.65
  17. 胃内定植菌与慢性阻塞性肺病患者呼吸机相关肺炎的关系及其部分影响因素的研究,R563.9
  18. 蟹类过敏原的研究,R155.3
  19. 抗SARS-CoV单克隆抗体的鉴定及应用研究,R392.1
  20. 鸡传染性法式囊病毒VP2蛋白B细胞抗原表位的研究,S852.65

中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 禾谷类作物 > 荞麦
© 2012 www.xueweilunwen.com