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黄芩单体成分在母胎免疫中的作用机制研究

作　者: 马爱团
导　师: 钟秀会
学　校: 河北农业大学
专　业: 临床兽医
关键词: 溴隐亭黄芩苷 IFN-γ 孕酮着床
分类号: S853.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2005年
下　载: 98次
引　用: 6次
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内容摘要

课题主要研究不同剂量溴隐亭对小鼠的致流产作用及黄芩单体成分黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对溴隐亭所致流产小鼠的保胎效果。通过原位杂交、免疫印迹及测定血清、子宫匀浆中IFN-γ和孕酮的含量,探讨黄芩单体成分的保胎作用及可能机制,阐明妊娠早期母胎界面的免疫关系,寻找预防早期胚胎丢失的措施。将孕鼠分为对照组、酒精组及0.025、0.05、0.075、0.1、0.2mg不同剂量溴隐亭组,于孕5～7d皮下注射,孕10d观察妊娠结局。结果0.075mg溴隐亭组流产率为75%,与对照组比较差异极显著(P<0.01),具有低P、低催乳素(PRL)及偏向于Th1反应的特点,可以作为免疫及内分泌功能紊乱的流产模型用于研究母胎界面的免疫关系,因此选择0.075mg溴隐亭继续下面的实验。小鼠于孕1～7d分别灌服蒸馏水及黄芩煎剂、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素,于5～7d皮下注射0.075mg溴隐亭,10d宰杀。结果黄芩苷组的流产率在各组中最低,与蒸馏水组比较有显著差异。然后又将黄芩苷分为0.1、0.5、1mg三组,于孕1～7d灌服小鼠,5～7d皮下注射溴隐亭,分别于孕3、5、7、10、12d眼球放血致死。取血清和右侧子宫匀浆液,用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测孕酮及Th1型细胞因子的代表IFN-γ的含量;通过免疫印迹检测IFN-γ蛋白的表达。取左侧子宫用波恩液(Bouin’s)固定,通过原位杂交检测IFN-γmRNA在子宫内膜中的表达。免疫印迹结果显示在45kD左右处有明显条带,此处为IFN-γ双体的位置。经原位杂交检测子宫组织INF-γmRNA的表达,结果显示,溴隐亭不同剂量组之间阳性颗粒数有显著差异,与ELISA测定的结果一致。而黄芩苷不同剂量组之间差异不显著,与ELISA测定的各处理组子宫组织中IFN-γ含量有很大差别。这说明IFN-γ在子宫局部发挥免疫调节作用是转录水平的调控,而黄芩苷发挥保胎作用是翻译水平的调节。另外各组在孕5d均出现IFN-γ含量高峰,说明在围着床期,由于胚胎的植入,引发局部炎性反应,细胞因子网络亦随之发生变化。通过孕酮的测定表明,随妊娠的进行,孕酮含量持续增高以促进子宫内膜容受性,有利于胚泡的植入及胎盘的形成发育,维持胚胎持续生长发育。这样黄芩苷在胚泡与子宫黏膜的接触过程中,上调IFN-γ促进胚泡的黏附,胚泡着床后又下调IFN-γ含量,并维持孕酮的分泌,这样创造适宜的子宫环境,利于胚胎着床和进一步发育。

全文目录

1 引言  9-12
2 材料与方法  12-22
  2.1 主要材料与仪器  12-13
    2.1.1 主要试剂及药品  12
    2.1.2 主要仪器设备  12-13
  2.2 方法与程序  13-21
    2.2.1 确定溴隐亭的流产效果  13-14
    2.2.2 不同黄芩成分保胎作用的比较  14-15
    2.2.3 不同剂量黄芩苷保胎作用的比较  15
    2.2.4 子宫组织原位杂交检测IFN-γ mRNA的表达  15-17
    2.2.5 免疫印迹检测IFN-γ蛋白的表达  17-20
    2.2.6 ELISA测定血清及子宫组织中IFN-γ的含量  20-21
    2.2.7 ELISA测定血清及子宫组织中孕酮的含量  21
  2.3 统计处理  21-22
3 结果  22-43
  3.1 溴隐亭的流产效果及黄芩成分保胎作用的比较  22-25
    3.1.1 溴隐亭流产效果的判定  22-23
    3.1.2 不同黄芩成分保胎作用的比较  23-25
  3.2 不同剂量黄芩苷保胎作用的比较  25-31
    3.2.1 不同宰杀时间小鼠的剖检结果  25
    3.2.2 不同宰杀时间小鼠妊娠结果统计  25-31
  3.3 子宫组织干扰素原位杂交结果  31-32
  3.4 免疫印迹结果  32-33
  3.5 ELISA测定血清及子宫组织中干扰素的含量  33-38
  3.6 孕酮的测定  38-43
4 讨论  43-49
  4.1 溴隐亭对小鼠的流产效果  43-45
  4.2 黄芩成分对母胎免疫状态的影响  45-46
  4.3 黄芩苷保胎机理初探  46-48
  4.4 着床期免疫网络的调节  48-49
5 结论  49-50
参考文献  50-56
附录  56-61
在读期间发表的学术论文(第一作者)  61-62
作者简历  62-63
致谢  63-64
附录  64-84
  黄菩黄酮成分药理研究新进展  66-84

黄芩单体成分在母胎免疫中的作用机制研究

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