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共振瑞利散射测定核酸和抗生素的新方法研究

作　者: 胡小莉
导　师: 刘绍璞
学　校: 西南师范大学
专　业: 分析化学
关键词: 共振瑞利散射新方法研究四环素类抗生素氨基糖苷核酸阳离子表面活性剂盐酸氯丙嗪强力霉素硫酸庆大霉素十六烷基
分类号: O657.99
类　型: 硕士论文
年　份: 2001年
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内容摘要

共振瑞利散射（RRS）方法是近几年迅速发展起来的新分析技术，因其灵敏度高、选择性好、操作简便等显著特点而备受分析工作者的关注。目前，它已广泛应用于核酸、蛋白质等生物大分子及痕量元素的测定，用于抗生素类药物的分析鲜见报道。本文研究了盐酸氯丙嗪-核酸，氨基糖苷类抗生素-核酸，阳离子表面活性剂-核酸，酸性双偶氮-氨基糖苷类抗生素和镧（Ⅲ）-四环素类抗生素等五种新体系的RRS光谱极其在核酸和抗生素测定中的应用，探讨了它们的光谱特性、影响因素、分析参数和实际应用，建立了方便、快速测定核酸和抗生素药物的新方法。其中，阳离子表面活性剂-核酸体系可用于纳克级核酸的分析；氨基糖苷类抗生素-核酸体系中，庆大霉素和卡那霉素对DNA测定具有很好的特异性，对RNA不产生响应信号；镧（Ⅲ）-四环素类抗生素体系对测定金霉素和强力霉素有很高的选择性，而结构与性能相似的四环素类其他成员如土霉素及四环素则无RRS响应，这与量子化学半经验程序计算结果一致。一、盐酸氯丙嗪-核酸体系在pH2-3的BR缓冲溶液中，核酸与盐酸氯丙嗪作用，产生强烈的共振瑞利散射信号，最大散射峰位于400nm。以小牛胸腺DNA为例，研究了体系适宜条件及方法的选择性。DNA浓度在0～4.0μg／mL、RNA浓度在0～8.2μg／mL范围内与散射强度成线性关系，检测限分别为7.6ng／mL（ctDNA）、11.3ng／mL（hDNA）、11.5ng／mL（sDNA）和28.4ng／mL（yRNA）。用于四个合成样的分析，准确性高，重复性好。二、氨基糖苷类抗生素-核酸体系在弱酸性BR缓冲溶液中，核酸与新霉素、卡那霉素、妥布霉素和庆大霉素等氨基糖苷类抗生素反应，产生强烈的共振瑞利散射信号，四种抗生素-核酸体系具有相似的RRS光谱图，最大共振峰位于470nm附近。用于核酸的测定，线性范围广（ctDNA:0-10μg／mL，yRNA:0-16μg／mL）。灵敏度高，检测限分别为ctDNA（ng／mL）： 13．2（GEN），门．4（KANA），11．4（TOB），13．8（NE）巾DNA（＂g／mL）：15石（GEN），20石（KA NAL12．4（TOB），16．speEO）；yRNA（y玫mL）：39＊（TOB），26．7则EO）。其中，庆大霉素和卜那霉素对DN A测定具有很好的特异性，对RNA无信号响应。用于合成样品的分析，结果满意。三．阳离子表面活性剂－核酸体系在弱酸或弱碱性BR缓冲介质中，澳化十六烷基毗唆（CPB）、澳化十四烷基毗 IQ叮PB人氯化十六烷基H甲基芋铰（CDBAC人氯化十四烷基H甲基芋锁（Zeph）和涣化十六烷基三甲馁（CTAB）与小牛胸腺 DNA和酵母 NA混合，因静电引力及长链烷基的疏水作用而导致共振瑞利散射显著增强，最大共振峰位于470urn处。方法对DNA测定有很高的灵敏度，五个体系检测限在6．6l．3卜g／mL之间；对RNA 测定则有较宽的线性范围，均超过 8．0卜g／mL。文中重点讨论了各体系灵敏度与阳离于表面活性剂（＊S）性质的关系：总结出g S强度与＊S的浓度和分子量之间的规律以及CS的浓度对核酸构象的影响。方法用于合成样品中核酸的测定，结果满意。四．某些酸性双偶氮染料－氨基糖苦类抗生素体系依文思蓝爬B卜曲利本蓝厂BX 曲利本红oR贞滂胺天蓝OSB）等酸性双偶氮染料在酸性条件下，与硫酸卡那霉素、硫酸新霉素、硫酸庆大霉素和硫酸妥位霉素等氨基糖昔类抗生素形成离子缔合物，从而产生强烈的共振瑞利散射信号，最大散射山5别＜】 400urn（TR）、360urn（EB）及370urn（TB和 PSB）。线性范围 0－6＊卜g／mL，此测限14．4习6．sngimL。四种染料用于测定抗生素，TR－抗生素体系灵敏度最高；对厂十忡11染料，测定灵敏度从高到低的顺序依次为 KANA＞NEOtoTOBDeGEN。用于小W仇牛素注射液或滴耳液分析，获得满意结果。 IL．卜才’－凹环素类抗生素分析在弱碱性TriS－HCI缓冲溶液中，三价金属谰离子与金霉素aTC＼强力霉素（DOTC）牛成稳定六元螫合物，产生RRS增强，特征峰位于450urn（CTC－La卜）、 422fill（JOI”C－l。1’）。义敏）XI：J达（X10“’lllol／L）7刀（DOTC）和 8．3（CTC）。方i上刘测定金离素和强力霉素有特异性，砌结构和性能相似的四环素族其他药物如四环索门”C）及上霉素（0＊C）对分析不干扰。这与量于化学半经验程序（＊MI）计削吉果·致。山此建立测定上；述药物的高选择性、高灵敏度axs法，用于合成样，认中＊＊C汝＊＊＊C的测定，结果满意。

全文目录

1．中文摘要  4-6
2．英文摘要  6-10
3．前言  10-37
4．实验部分  37-90
  第一部分核酸的测定  37-65
    （1）核酸-氯丙嗪体系  37-45
    （2）核酸-抗生素体系  45-54
    （3）核酸-阳离子表面活性剂体系  54-65
  第二部分抗生素分析  65-90
    （1）氨基糖苷类抗生素-酸性偶氮染料  65-81
    （2）四环素类抗生素-稀土离子  81-90
5．参考文献  90-100
致谢  100

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