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荷斯坦奶牛BoLA-DRB3基因多态性与隐性乳房炎相关性研究

作　者: 王彦亮
导　师: 何高明
学　校: 石河子大学
专　业: 临床兽医
关键词: 乳房炎调查 BoLA-DRB3基因 PCR-RFLP SCC
分类号: S858.23
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

乳房炎是奶牛的一种常见病,是造成奶牛业损失最严重的疾病之一。奶牛MHC又称为牛淋巴细胞抗原(BoLA),其中,DRB3基因是其中多态性最为丰富的基因位点,可高度表达在动物机体的免疫系统中发挥着极其重要的作用,并与许多疾病的抗性、易感性存在着密切关系。因此,研究奶牛BoLA-DRB3的多态性与隐性乳房炎相关性,对奶牛隐性乳房炎的防治研究具有重要意义。试验一使用BMT试剂对新疆石河子150团牛场进行了隐性乳房炎调查。在调查的574头奶牛中,阳性头数为306头,患病率约为53.31%,乳区阳性率为24.15%。试验二选取150团的隐性乳房炎和健康奶牛各80头,采用Hae III和BstY I酶切通过PCR-RFLP方法分析了BoLA-DRB3基因多态性与乳房炎相关性。结果如下: PCR扩增得到一条305bp的特异性片段;酶切分析共检测到5个等位基因,9种基因型。HaeⅢ酶切位点的碱基突变偏离Hardy-Weinberg平衡状态(P <0.01),而BstYI酶切位点碱基突变达到Hardy-Weinberg平衡状态(P >0.05)。基因型HaeⅢBB和基因HaeⅢB可能与乳房炎易感性有关(P <0.01);基因型HaeⅢAA和基因HaeⅢA与乳房炎抗性有关(P <0.01)。而BstYI酶切基因型和基因频率在感染牛和健康牛中的分布差异均不显著(P >0.05),故不能确定某种基因和基因型是否与牛乳房炎的抗性或易感性存在关联。基因型HaeⅢBB和BstYIBB与高SCC相关(P <0.01),HaeⅢAA与低SCC相关(P < 0.05)。

全文目录

摘要  6-7
ABSTRACT  7-11
前言  11-12
第一篇：文献综述  12-20
  1. BoLA-DRB3 的研究进展  12-19
    1.1 主要组织相容性复合体（MHC）概述  12
    1.2 BoLA-DRB3 基因结构  12-13
    1.3 BoLA-DRB3 基因多态性  13-17
      1.3.1 国外研究进展  14-15
      1.3.2 国内研究进展  15-17
    1.4 BoLA-DRB3 基因与乳房炎的相关性  17-19
      1.4.1 BoLA-DRB3 基因与乳房炎抗性和易感性及其病原的相关性  17-18
      1.4.2 BoLA-DRB3 基因与体细胞数( SCC)的相关性  18-19
  2. 本研究的目的意义  19-20
第二章：奶牛场隐性乳房炎的调查分析  20-32
  1 材料与方法  20-22
    1.1 实验动物  20
    1.2 主要试剂及材料  20
    1.3 奶样采集  20-21
    1.4 判定标准  21
    1.5 检测方法  21-22
      1.5.1 隐性乳房炎诊断  21
      1.5.2 调查搜集资料  21
      1.5.3 统计分析  21-22
  2 结果与分析  22-28
    2.1 奶牛隐性乳房炎阳性率  22
    2.2 奶牛隐性乳房炎发生率与不同乳区的关系  22-24
    2.3 奶牛隐性乳房炎发生率与年龄的关系  24-25
    2.4 奶牛隐性乳房炎发生率与胎次的关系  25-26
    2.5 奶牛隐性乳房炎发生率与泌乳阶段的关系  26-27
    2.6 奶牛隐性乳房炎发生率与产奶量的关系  27-28
  3. 讨论  28-32
    3.1 奶牛隐性乳房炎的发生与年龄、胎次、日产奶量之间的关系  28-29
    3.2 奶牛隐性乳房炎的发生与泌乳阶段之间的关系  29
    3.3 奶牛隐性乳房炎的发生与不同乳区之间的关系  29
    3.4 奶牛隐性乳房炎的发生其他影响因素  29-30
      3.4.1 人为和环境因素  29-30
      3.4.2 病原微生物因素  30
    3.5 解决办法  30-32
      3.5.1 药物疗法  30
      3.5.2 切断病原菌传播途径  30-31
      3.5.3 加强饲养管理  31
      3.5.4 建立定期监测制度  31
      3.5.5 淘汰病牛和抗病育种  31-32
第三章：荷斯坦奶牛BoLA-DRB3 基因多态性与隐性乳房炎相关性  32-49
  1 材料与方法  32-39
    1.1 实验材料  32-33
      1.1.1 试验动物  32
      1.1.2 药品和试剂  32-33
      1.1.3 主要仪器  33
    1.2 试验方法  33-38
      1.2.1 血样和奶样的采集  33-34
      1.2.2 SCC 的显微镜测定  34
      1.2.3 基因组 DNA 的提取  34-35
      1.2.4 DNA 浓度和纯度的检测  35
      1.2 5 琼脂糖凝胶电泳检测  35
      1.2.6 PCR 扩增反应  35-37
      1.2.7 PCR 产物酶切（PCR-RFLP）  37-38
    1.3 统计分析  38-39
      1.3.1 基因频率和基因型频率的统计方法  38-39
      1.3.2 Hardy-Weinberg 平衡检验  39
  2 结果与分析  39-45
    2.1 BoLA-DRB3 基因PCR 扩增  39-40
    2.2 BoLA-DRB3 基因的PCR-RFLP 结果  40-42
    2.3 BoLA-DRB3 基因基因型频率与基因频率分析  42
    2.4 Hardy-Weinberg 平衡检验分析  42-43
    2.5 BoLA-DRB3基因型和等位基因频率在健康牛和感染牛间的分布  43-44
    2.6 基因型与牛乳中体细胞数SCC 关系  44-45
  3 讨论  45-49
    3.1 关于影响PCR 扩增反应的因素  45
    3.2 荷斯坦奶牛DRB3 基因的PCR 扩增  45
    3.3 PCR-RFLP 技术在 MHC 基因型鉴定中应用的可行性分析  45-46
    3.4 BoLA-DRB3 基因多态性分析  46-47
      3.4.1 BoLA-DRB3 多态性的检测  46
      3.4.2 BoLA-DRB3 多态性的分析  46
      3.4.3 Hardy-Weinberg 平衡检验分析  46-47
    3.5 BoLA-DRB3 多态性基因与乳房炎关系  47
    3.6 BoLA-DRB3 基因与体细胞数的相关性分析  47-49
第四章：结论  49-50
参考文献  50-54
附录  54-55
  附录1 本文部分缩写的中英文对照  54-55
致谢  55-56
作者简介  56
硕士期间发表文章  56

荷斯坦奶牛BoLA-DRB3基因多态性与隐性乳房炎相关性研究

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