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补益阳明津气方药对初老雌性大鼠卵巢机能影响的实验研究

作　者: 伍学珍
导　师: 谭万信
学　校: 成都中医药大学
专　业: 中医妇科学
关键词: 补益阳明津气 初老雌性大鼠 卵巢 延缓衰老 实验研究
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要


目的:经实验研究探讨“补益阳明津气”方药益胃汤对初老雌性大鼠卵巢机能影响的作用机理,与前期研究相结合以共同佐证中医传统经典理论“五七,阳明脉衰”在绝经前期生殖轴机能衰老中的意义和作用。为延缓绝经前期卵巢机能衰老,促进绝经前期妇女健康,防治相关病症,提供一种新的研究与论治思路。方法:4月龄～6月龄SD雌性大鼠为正常对照组;10月龄～12月龄,阴道细胞学表现动情期延长的SD雌性大鼠作为初老模型大鼠。模型动物随机分为:(1)益胃汤高剂量组、(2)益胃汤中剂量组、(3)益胃汤低剂量组、(4)六味地黄丸组、(5)己烯雌酚组、(6)模型对照组。各给药组灌胃4周后,断头处死,取子宫和卵巢称重,用于子宫和卵巢系数的检测,其中左侧卵巢组织采用免疫组化法检测ER、FSHR表达;右侧卵巢组织用于检测细胞凋亡指标Bcl-2 mRNA、Bax mRNA、Fas mRNA、FasL mRNA、Caspase3 mRNA的表达;部分卵巢组织用电镜观察其组织学变化和超微结构。结果:与模型对照组比较,生殖内分泌机能调控方面:“补益阳明津气”方药益胃汤能增加大鼠子宫指数、卵巢指数,使卵巢ER、FSHR表达上调。细胞凋亡的研究方面:益胃汤可使卵巢Bcl-2 mRNA表达增强,Bax mRNA表达减弱,Fas mRNA、FasL mRNA、Caspase3 mRNA表达下调,抑制卵巢细胞凋亡,但未能恢复至正常对照组水平;电镜观察益胃汤可丰富卵巢颗粒细胞内线粒体和滑面内质网,胞质内有大量脂滴,凋亡小体少见。与模型对照组比较,己烯雌酚组和六味地黄丸组能促进卵泡生长,正向调节卵巢的ER和FSHR表达。与益胃汤相比较本实验研究结果显示:己烯雌酚组对ER、FSHR上调作用不及益胃汤高剂量组;六味地黄丸上调ER、FSHR的作用与益胃汤中剂量无明显差异,但高于益胃汤低剂量组。与模型对照组比较,己烯雌酚组和六味地黄丸在一定程度上抑制卵巢细胞的凋亡。与益胃汤相比较,己烯雌酚组Bcl-2 mRNA表达低于益胃汤高剂量组,FasmRNA、FasL mRNA、Caspase3 mRNA高于益胃汤高剂量组,Bax mRNA表达两组无显著差异。六味地黄丸组Bcl-2 mRNA、Bax mRNA表达与益胃汤中、低剂量组无明显差异,Fas mRNA、FasL mRNA表达高于益胃汤中剂量组,与低剂量组无明显差异,Caspase3 mRNA水平低于益胃汤低剂量组,与中剂量组无明显差异。结论:实验研究提示益胃汤具有类雌激素样作用,促进卵泡生长,改善初老雌性大鼠卵巢的激素内环境,并能抑制卵巢细胞凋亡等作用。这些作用可能是其延缓卵巢机能衰老的机理。

全文目录


中文摘要  2-4
Abstract  4-6
目录  6-9
缩略词表  9-10
引言  10-13
实验研究  13-45
  1.实验研究材料  13-14
    1.1 研究对象  13
    1.2 受试药物  13
    1.3 主要试剂和药品  13-14
    1.4 主要仪器和设备  14
  2.实验方法  14-19
    2.1 模型的建立  14-15
      2.1.1 初老大鼠模型  14-15
      2.1.2 正常对照大鼠  15
    2.2 分组及给药方法  15-16
    2.3 检测项目  16-19
      2.3.1 子宫重量系数、卵巢重量系数  16
      2.3.2 免疫组化  16-17
        2.3.2.1 组织标本的采集与处理方法  16
        2.3.2.2 SP检测方法  16-17
        2.3.2.3 图像分析方法  17
      2.3.3 原位杂交  17-19
        2.3.3.1 标本的采集与制备  17
        2.3.3.2 原位杂交检测方法  17-19
          2.3.3.2.1 试剂的配置  17-18
          2.3.3.2.2 检测方法  18-19
        2.3.3.3 图像分析方法  19
      2.3.4 益胃汤对卵巢颗粒细胞超微结构的调控作用  19
    2.4 实验资料的统计与处理  19
  3.实验结果  19-31
    3.1 益胃汤对子宫重量系数、卵巢重量系数的影响  19-21
    3.2 益胃汤对卵巢ER、FSHR的影响  21-24
    3.3 益胃汤对初老大鼠卵巢细胞凋亡的影响  24-29
    3.4 益胃汤对初老雌性大鼠颗粒细胞超微结构的影响  29-31
  4.讨论  31-45
    4.1 模型动物的选择  31-32
      4.1.1 实验动物的选择  31
      4.1.2 围绝经期模型动物的选择  31-32
      4.1.3 本研究实验动物模型的判定  32
    4.2 对照药物的选择  32-34
      4.2.1 己烯雌酚的选择  32-33
      4.2.2 六味地黄丸的选择  33-34
    4.3 补益阳明津气的立法依据和处方原则  34-38
      4.3.1 祖国医学对"阳明"的认识  34-36
        4.3.1.1 胃为水谷之海,气血生化之源  34-35
        4.3.1.2 阳明脉与冲任  35-36
      4.3.2 "阳明脉衰"与衰老的相关性  36
      4.3.3 未病先防,补益阳明,后天养先天  36-37
      4.3.4 治疗上以益胃生津为法  37-38
    4.4 益胃汤对卵巢内分泌机能的影响  38-40
      4.4.1 益胃汤对子宫、卵巢重量系数的影响  38-39
      4.4.2 益胃汤对卵巢激素受体的影响  39-40
    4.5 益胃汤对卵巢细胞凋亡的影响  40-45
      4.5.1 分子原位杂交检测凋亡基因对卵巢细胞凋亡的影响  40-43
        4.5.1.1 益胃汤对线粒体通路的影响  40-41
        4.5.1.2 益胃汤对死亡受体通路的影响  41-42
        4.5.1.3 降低凋亡信号,抑制卵巢细胞凋亡  42-43
      4.5.2 电镜观察益胃汤对卵巢颗粒细胞凋亡的影响  43-45
结语  45-48
  1.本课题研究思路和创新点  45-46
    1.1 课题研究思路  45
    1.2 实验研究思路  45-46
    1.3 实验研究结论  46
  2.存在的问题和展望  46-48
    2.1 存在的问题  46-47
    2.2 展望  47-48
致谢  48-49
参考文献  49-52
综述:  52-62
在校期间公开发表的学术论文、专著及科研成果  62-63

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