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微生物谷氨酰胺转胺酶的发酵及其在大鼠创伤愈合中的应用研究
作 者: 谈丹
导 师: 王金华
学 校: 湖北工业大学
专 业: 发酵工程
关键词: 微生物谷氨酰胺转胺酶 维生素 Plackett-Burrman设计 中心组合设计 结构模型 创伤愈合 大鼠创伤模型
分类号: R641
类 型: 硕士论文
年 份: 2008年
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内容摘要
谷氨酰胺转胺酶(EC2.3.2.13,蛋白质-谷氨酸-γ谷氨酰胺转胺酶,Transglutaminase,缩写为TGase)可催化蛋白质分子间或分子内共价键的形成,从而改变各种蛋白质的功能性质,在食品、化妆品、医药等领域具有广阔的应用前景。传统上TGase主要从动物组织提取,但基于经济上的考虑,必须去寻求更便利及经济的来源,微生物发酵法原料廉价,生产成本低,是进行大规模工业化生产最有效的方法。本文主要研究了维生素对Streptoverticillium SG 215发酵生产MTG的影响,并优化了其添加量以期提高发酵单位酶活力;并在实验室优化工艺的基础上建立了其分批发酵的动力学方程;最后探索研究了微生物谷氨酰胺转胺酶对大鼠创伤的促愈合作用。顺序采用Plackett-Burrman设计、最速上升法以及中心组合方法研究了维生素B1等9种维生素对Streptoverticillium SG 215生产谷氨酰胺转胺酶的影响。结果表明泛酸钙和对氨基苯甲酸对MTG的发酵具有显著性的促进作用。中心组合优化得到发酵培养基中最佳的维生素组合是VB1 20mg/L,VB2 0.5mg/L,烟酸6mg/L,泛酸钙0.028mg/L,烟酸吡多醇0.50mg/L,生物素20mg/L,对氨基苯甲酸0.044mg/L,叶酸0.4mg/L,吡哆醛盐酸盐0.2mg/L,其发酵末MTG活力达2.42U/ml,较未添加维生素之前(1.58U/ml)提高了41.77%。对谷氨酰胺转胺酶生产菌Streptoverticillium SG 215分批发酵动力学模型进行了研究。建立了比较合理的谷氨酰胺转胺酶分批发酵动力学模型:细胞生长动力学模型为:(?);MTG合成动力学模型为:(?);葡萄糖消耗动力学模型为:(?)。模型的计算结果和试验测定值吻合较好,基本能反映发酵过程中相关指标的变化规律,可用于发酵产量的预测。最后研究了微生物谷氨酰胺转胺酶对大鼠创伤的促愈合作用。结果实验组创面愈合时间平均为18.1天,较对照组平均缩短了2-3天(P<0.05);创伤愈合率显著提高(P<0.05或P<0.01);伤腔容积明显缩小(P<0.05);实验组肉芽干湿重较对照组显著增加(P<0.05),肉芽中蛋白质、氨基已糖和己糖醛酸含量增加显著(P<0.05)。结果显示谷氨酰胺转胺酶具有促进大鼠皮肤创伤愈合的作用。
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全文目录
摘要 4-6 Abstract 6-8 目录 8-11 第1章 绪论 11-27 1.1 谷氨酰胺转胺酶的分子结构 12-13 1.2 谷氨酰胺转胺酶的作用机制 13-14 1.3 谷氨酰胺转胺酶的分类及特性 14-19 1.3.1 植物性来源TG 14-15 1.3.2 动物性来源TG 15-17 1.3.3 微生物性来源TG 17-19 1.4 谷氨酰胺转胺酶的应用 19-24 1.4.1 食品工业 19-23 1.4.2 纺织工业 23-24 1.4.3 临床医疗 24 1.4.4 生化分析 24 1.5 立题背景及意义 24-26 1.5.1 国内外微生物发酵生产谷氨酸胺转胺酶的研究现状 24-25 1.5.2 微生物发酵生产谷氨酸胺转胺酶存在的问题 25-26 1.6 本文研究内容 26-27 第2章 维生素对谷氨酰胺转胺酶发酵的影响及优化 27-51 2.1 材料与方法 29-34 2.1.1 试验材料 29-30 2.1.2 分析方法 30-32 2.1.3 试验方法 32-34 2.2 结果与讨论 34-50 2.2.1 MTG酶活力测定标准曲线 34-35 2.2.2 九种维生素对谷氨酰胺转胺酶发酵的影响 35-43 2.2.3 Plackett-Burrman筛选显著性影响产酶的维生素试验结果 43-46 2.2.4 最速上升试验设计及结果 46-47 2.2.5 中心组合设计 47-50 2.2.6 模型最优值的验证 50 2.3 本章小结 50-51 第3章 谷氨酰胺转胺酶分批发酵的动力学研究 51-64 3.1 材料与方法 52-58 3.1.1 试验材料 52-53 3.1.2 试验方法 53-54 3.1.3 动力学模型 54-58 3.2 结果与讨论 58-63 3.2.1 MTG分批发酵试验 58-59 3.2.2 菌体生长模型 59-60 3.2.3 MTG生成模型 60-61 3.2.4 基质消耗动力学模型 61-63 3.3 本章小结 63-64 第4章 微生物谷氨酰胺转胺酶对大鼠创伤愈合作用的实验研究 64-75 4.1 材料与方法 64-67 4.1.1 试验材料 64-65 4.1.2 试验方法 65-66 4.1.3 评价指标及测定计算方法 66-67 4.1.4 统计学处理 67 4.2 结果与讨论 67-74 4.2.1 创面一般观察 67 4.2.2 MTG对大鼠创伤愈合时间的影响 67-68 4.2.3 MTG对大鼠创伤愈合率的影响 68-69 4.2.4 MTG对大鼠伤腔容积的影响 69 4.2.5 MTG对大鼠创面肉芽组织干湿重的影响 69-71 4.2.6 MTG对大鼠创面肉芽组织中蛋白质含量的影响 71 4.2.7 MTG对大鼠创面肉芽组织中羟脯氨酸的影响 71-72 4.2.8 MTG对大鼠创面肉芽组织中氨基已糖和己糖醛酸含量的影响 72-74 4.3 本章小结 74-75 第5章 结论与展望 75-77 5.1 主要结论 75 5.2 研究展望 75-77 参考文献 77-85 致谢 85-86 附录 86-87
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中图分类: > 医药、卫生 > 外科学 > 创伤外科学 > 创伤
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