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天然低分子肝素制备及其硫酸化修饰条件的研究

作　者: 李雷刚
导　师: 张丽萍
学　校: 黑龙江八一农垦大学
专　业: 食品科学
关键词: 低分子肝素亚硝酸降解修饰结构生物活性
分类号: TQ464.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 46次
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内容摘要

低分子肝素作为一种重要的抗凝血药物,是由肝素经化学法、酶法或物理法降解或分离得到的分子量在3000～8000Da的糖氨聚糖片段。与传统的肝素相比,低分子肝素具有抗血栓作用强、出血副作用小、生物利用度高、血浆半衰期长等优点,在国际市场上已开始逐渐取代肝素。为进一步提高低分子肝素在抗FXa与抗FⅡa活性比率、小于8000Da的含量、得率等方面的特性,本研究以肝素为原料,通过不同制备技术的比较、制备方法工艺参数的优化等研究,寻找出制备低分子肝素的技术方法。1.低分子肝素不同制备技术的比较与分析。分别比较了有机溶剂法、透析过滤法、过氧化降解氢法、亚硝酸降解法、β-消去降解法等制备低分子肝素的物理、化学方法,采用单因素试验和正交试验,通过平均分子量、得率、小于8000Da的含量以及与标准品分子量之差等指标的综合分析,最终确定亚硝酸降解法为制备低分子肝素的最佳方法。2.亚硝酸降解法制备低分子肝素工艺参数的优化。利用单因素试验、二次旋转正交组合试验、响应面分析等方法,对亚硝酸降解法制备低分子肝素的工艺参数进行了优化研究,得到最佳反应时间为4h、温度25℃、亚硝酸浓度0.6%、pH2.6,在此条件下低分子肝素平均分子量为4600Da±95Da,分子量小于8000Da的含量为89.95%±1.2%,产品与标准品分子量之差为2.1%,回收率为80%±2.3%,高于国际和国内低分子肝素标准,但亚硝酸降解过程中使低分子肝素的硫酸基团部分丢失,导致其活性的降低。3 .低分子肝素硫酸化基团修饰条件的研究。由于亚硝酸降解过程中使低分子肝素的硫酸基团被降解,导致其活性的降低,因此,对低分子肝素进行硫酸化基团修饰。结合低分子肝素的结构及性质,选择了Wolfrom法、DMF法、浓硫酸法、硫酸氢钠法等四种修饰方法,通过单因素试验与正交试验,以取代度为指标,对修饰条件进行了比较分析,并对以上四种方法修饰后的低分子肝素进行了抗FXa与抗FⅡa活性及红外结构的测定,结果表明Wolfrom法为进行低分子肝素硫酸基团修饰的最佳方法。4.低分子肝素理化性质的测定。按照中国药典的规定,对低分子肝素的理化性质进行了鉴定,结果表明各项指标均符合药典要求。

全文目录

摘要  3-4
Abstract  4-7
第一章引言  7-18
  1.1 LMWH 概述  7-9
  1.2 LMWH 制备技术研究现状  9-13
  1.3 多糖类物质基团修饰的研究  13
  1.4 LMWH 分子量、分子量分布、结构及生物活性测定  13-16
  1.5 课题研究的背景及意义  16
  1.6 课题主要研究内容  16-18
第二章天然低分子肝素不同制备技术的比较与分析  18-28
  2.1 试验材料与设备  18-19
  2.2 实验方法  19-22
  2.3 结果与分析  22-27
  2.4 本章小结  27-28
第三章亚硝酸降解法制备低分子肝素的工艺参数优化  28-40
  3.1 实验材料与设备  28-29
  3.2 实验方法  29-31
  3.3 结果与分析  31-38
  3.4 本章小结  38-40
第四章天然低分子肝素硫酸基团修饰条件的研究  40-61
  4.1 实验材料与设备  40-41
  4.2 试验方法  41-43
  4.3 结果与分析  43-60
  4.4 本章小结  60-61
第五章结论与建议  61-62
  5.1 结论  61
  5.2 创新点  61
  5.3 建议  61-62
参考文献  62-67
致谢  67-68
作者简介  68-69
缩略词  69

天然低分子肝素制备及其硫酸化修饰条件的研究

内容摘要

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