学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

地衣芽孢杆菌（BL）抗菌蛋白对油菜菌核病菌的抑制与破坏作用及防病效果

作　者: 孙启利
导　师: 徐敬友
学　校: 扬州大学
专　业: 植物病理学
关键词: 地衣芽孢杆菌抗菌蛋白油菜菌核病菌抑制作用多菌灵腐霉利毒力测定防病效果
分类号: S435.654
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 198次
引　用: 3次
阅　读: 论文下载

内容摘要

地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)W10培养菌液和滤液对油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)具有较强的拮抗能力。其培养滤液经硫酸铵沉淀和透析提取的抗菌蛋白处理病菌菌丝后,菌丝出现形态异常甚至断裂;细胞膜透性改变,电解质渗漏而电导率增加。该抗菌蛋白能强烈抑制病菌菌丝生长,当蛋白浓度为100μg/mL时,抑制率达90%以上;能显著抑制菌核形成,当蛋白浓度为100μg/mL时,菌核不能形成,且萌发推迟;能明显阻止子囊孢子萌发和芽管伸长,当蛋白浓度为200μg/mL时,孢子萌发和芽管伸长抑制率分别达46.0%和65.6%。对油菜菌核病菌进行室内药剂毒力测定。结果表明,腐霉利对病菌的EC50值为0.0126~0.5662μg/mL。根据32个野生菌株敏感性(EC50)频率分布,病菌对腐霉利的敏感基线为0.1981±0.022μg/mL(EC50)和1.1±0.1595μg/mL(MIC)。以5μg/mL为检测标准(MIC),油菜菌核病菌168个野生菌株中有15个抗多菌灵菌株,其中高抗(EC50>100μg/mL)菌株3个,其抗性频率为8.93%,但未检测到抗腐霉利菌株。经紫外线和药剂诱导获得抗药突变株YD38-6、YD38-8和YD21a,其中YD38-6、YD38-8菌株中抗腐霉利,EC50分别为41.33μg/mL和39.08μg/mL;YD21a菌株高抗腐霉利(EC50>100μg/mL)和多菌灵(EC50>100μg/mL)。试验指出,地衣芽孢杆菌抗菌蛋白对油菜菌核病菌的EC50值为20.94~33.83μg/mL,其毒力对抗、感多菌灵菌株和抗、感腐霉利菌株均无明显差异。抗菌蛋白与两种药剂复配后,大多数配比表现相加作用,但抗菌蛋白与腐霉利3 : 1配比对抗腐霉利菌株YD38-6则有明显的增效作用(SR=1.63)。盆栽试验显示,抗菌蛋白对油菜菌核病有较好的防治效果,当蛋白浓度为3000μg/mL时,防效达71.8%,与多菌灵和腐霉利1000μg/mL相当;抗菌蛋白与多菌灵或腐霉利3 : 1复配剂在1000μg/mL时,防效达67.9%~70.1%。因此,地衣芽孢杆菌W10抗菌蛋白作为一种新型生物农药可用于油菜菌核病的防治。

全文目录

中文摘要  8-10
英文摘要  10-12
前言  12-30
  一、油菜菌核病的发生及其危害  12-13
  二、油菜菌核病的防治  13-20
    （一）培育和利用抗病品种  13-15
    （二）化学防治  15-16
    （三）生物防治  16-20
  三、生防细菌的防病机制  20-26
    （一）抗生作用  20-24
    （二）竞争作用  24-25
    （三）诱导抗病性  25
    （四）重寄生作用  25-26
  四、生防细菌抗菌蛋白的研究  26-29
  五、本论文研究目的和意义  29-30
材料与方法  30-36
  一、供试菌株  30
    （一）拮抗细菌  30
    （二）油菜菌核病菌  30
  二、供试药剂  30-31
    （一）多菌灵  30
    （二）腐霉利  30-31
  三、培养基  31
    （一）肉汁冻培养液（BP）  31
    （二）马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）  31
  四、油菜菌核病菌抗药性菌株的筛选和诱导  31-32
    （一）抗腐霉利菌株的筛选和诱导  31-32
    （二）抗多菌灵菌株的检测  32
  五、地衣芽孢杆菌（BL）及其抗菌蛋白的拮抗测定  32
  六、BL 抗菌蛋白的提取  32-33
  七、BL 抗菌蛋白对油菜菌核病菌破坏作用的研究  33
    （一）对病菌菌丝形态破坏的观察  33
    （二）对病菌菌丝细胞膜透性影响的测定  33
  八、BL 抗菌蛋白对油菜菌核病菌抑制作用的研究  33-34
    （一）对病菌菌丝生长抑制的测定  33-34
    （二）对病菌菌核生成和萌发抑制的测定  34
    （三）对病菌子囊孢子萌发和芽管伸长抑制的测定  34
  九、BL 抗菌蛋白与药剂对油菜菌核病菌的毒力测定  34-35
    （一）药剂对病菌的毒力测定  34
    （二） BL 抗菌蛋白对病菌的毒力测定  34-35
    （三） BL 抗菌蛋白与药剂对病菌的联合毒力测定  35
  十、BL 抗菌蛋白与药剂对油菜菌核病的防治试验  35-36
结果与分析  36-47
  一、地衣芽孢杆菌及其抗菌蛋白对油菜菌核病菌的拮抗能力  36
  二、地衣芽孢杆菌抗菌蛋白对油菜菌核病菌的破坏作用  36-37
    （一） BL 抗菌蛋白对病菌菌丝形态的破坏  36-37
    （二） BL 抗菌蛋白对病菌菌丝细胞膜透性的影响  37
  三、地衣芽孢杆菌抗菌蛋白对油菜菌核病菌的抑制作用  37-39
    （一） BL 抗菌蛋白对病菌菌丝生长的抑制  37-38
    （二） BL 抗菌蛋白对病菌菌核生成和萌发的抑制  38
    （三） BL 抗菌蛋白对病菌子囊孢子萌发及芽管伸长的抑制  38-39
  四、地衣芽孢杆菌抗菌蛋白与药剂对油菜菌核病菌的毒力  39-45
    （一）腐霉利对病菌的毒力  39-42
    （二）多菌灵对病菌的毒力  42-43
    （三） BL 抗菌蛋白对病菌的毒力  43-44
    （四） BL 抗菌蛋白与药剂对病菌的联合毒力  44-45
  五、地衣芽孢杆菌抗菌蛋白及其复配剂对油菜菌核病的防治效  45-47
讨论  47-51
  一、油菜菌核病的生物防治  47-48
  二、BL 抗菌蛋白的作用方式  48-49
  三、蛋白类杀菌剂的研究与应用  49-51
参考文献  51-65
附录1（发表论文）  65-66
附录2（试验原始数据）  66-69
致谢  69-70
附：水稻内生枯草芽孢杆菌 G87 抗菌蛋白的提取、纯化及组成分析  70-89
  中文摘要  70
  英文摘要  70-71
  材料与方法  71-76
    一、供试菌株  71
      （一）拮抗细菌  71
      （二）水稻病原真菌  71
    二、培养基  71-72
      （一）肉汁冻培养液（BP）  71
      （二）马铃薯蔗糖琼脂培养基（PSA）  71-72
    三、主要试剂及仪器  72-73
      （一）主要试剂  72
      （二）主要仪器  72-73
    四、G87 抗菌蛋白的提取与纯化  73-74
      （一）粗蛋白提取  73
      （二） DE52 离子交换层析  73
      （三） Phenyl-Sepharose 6 Fast Flow 疏水层析  73-74
      （四） Sephadex G-75 凝胶过滤层析  74
    五、G87 抗菌蛋白拮抗活性的测定  74
    六、G87 抗菌蛋白分子量的测定  74
    七、G87 抗菌蛋白组成的测定  74-76
      （一）油红-O 染色液显色反应  74-75
      （二）蒽酮反应  75
      （三）双缩脲反应  75
      （四）茚三酮反应  75
      （五）硝酸反应  75
      （六）含糖量测定  75-76
  结果与分析  76-84
    一、水稻内生枯草芽孢杆菌 G87 抗菌蛋白的提取与纯化  76-80
      （一）粗蛋白提取及其抑菌活性  76-77
      （二） DE52 离子交换层析后蛋白及其抑菌活性  77
      （三） Phenyl-Sepharose 6 Fast Flow 疏水层析后蛋白及其抑菌活性  77-79
      （四） Sephadex G-75 凝胶过滤层析后蛋白及其抑菌活性  79-80
    二、水稻内生枯草芽孢杆菌 G87 抗菌蛋白的分子量  80-81
    三、水稻内生枯草芽孢杆菌 G87 抗菌蛋白的组成分析  81-84
      （一）是否含脂  81
      （二）否含糖及含糖量  81-83
      （三）是否含肽键  83
      （四）是否含α-氨基酸  83
      （五）是否含芳香族氨基酸  83-84
  讨论  84-87
    一、拮抗细菌抗菌蛋白的分离纯化  84-85
    二、芽孢杆菌抗菌蛋白的类型与特性  85-86
    三、G87 抗菌蛋白的应用前景  86-87
  参考文献  87-89

地衣芽孢杆菌（BL）抗菌蛋白对油菜菌核病菌的抑制与破坏作用及防病效果

内容摘要

全文目录

相似论文