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Na-PCP诱导L-02肝细胞氧化应激和线粒体损伤的实验研究

作　者: 康菊芳
导　师: 钟才高
学　校: 中南大学
专　业: 卫生毒理学
关键词: 五氯酚钠(Na-PCP) L-02肝细胞 氧化应激 线粒体损伤
分类号: R363
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要


目的:在体外试验系统(in vitro test),研究有机氯农药-五氯酚钠(Pentachlorophenol Sodium,Na-PCP)对L-02肝细胞氧化应激和线粒体损伤,为进一步了解五氯酚钠的毒作用机制奠定实验基础。方法:以L-02肝细胞为受试细胞,通过MTT试验检测不同浓度Na-PCP对L-02肝细胞存活率的影响,选择细胞存活率为20%～90%的浓度进行后续实验。设置1个对照组和5个Na-PCP处理组,即12.812mg/L、19.218mg/L、25.624mg/L、32.030mg/L和38.436mg/L,处理时间为24h,采用化学比色法检测Na-PCP对L-02肝细胞超氧化物岐化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量的影响;采用荧光分光光度法检测Na-PCP对L-02肝细胞线粒体膜电位(△Ψm)和线粒体通透性转运孔(permeability transition pore,PTP)的影响。设置1个对照组和9.609mg/L、12.812mg/L、19.218mg/L三个处理组,处理时间为24h,采用Western Blotting法检测Na-PCP对肝细胞p53、细胞色素C和凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor,AIF)的蛋白水平的影响。结果:1.在9.609mg/L～38.436mg/L浓度范围内,Na-PCP能明显引起L-02肝细胞存活率的降低,且存在着浓度.反应关系(r=-0.978,P＜0.01)。2.与对照组相比,12.812mg/L～38.436mg/L Na-PCP均可导致L-02肝细胞内MDA含量增加(r=0.956,P＜0.01),SOD活性下降(r=-0.900,P＜0.01),GSH含量减少(r=-0.975,P＜0.01)。3.与对照组比较,在12.812mg/L～38.436mg/L浓度范围内,随着Na-PCP染毒浓度的增加,线粒体PTP开放度明显增大(P＜0.01),且PTP开放度与浓度之间呈现明显的浓度-反应关系(r=0.997,P＜0.01)。4.与对照组比较,在12.812mg/L～38.436mg/L浓度范围内,Na-PCP导致荧光吸光度值升高,线粒体膜电位明显降低(P＜0.01),且膜电位的下降呈浓度依赖性(r=0.795,P＜0.01)。5.经9.609mg/L、12.812mg/L和19.218mg/L Na-PCP处理L-02肝细胞,各组细胞p53、细胞色素C和AIF的蛋白水平明显高于对照组细胞(P＜0.05)。结论:Na-PCP在9.609mg/L～38.436mg/L的浓度范围内,能引起L-02肝细胞存活率下降,诱发氧化损伤,表现为SOD酶活力和GSH含量下降,MDA含量上升。Na-PCP导致肝细胞线粒体膜电位崩溃和通透性转运孔开放度增大,并使得细胞色素C和AIF从线粒体释放增多。Na-PCP导致p53蛋白水平增高。

全文目录


摘要  4-6
ABSTRACT  6-10
第一章 前言  10-13
第二章 材料与方法  13-23
  2.1 材料  13-16
    2.1.1 受试生物  13
    2.1.2 仪器与设备  13-14
    2.1.3 主要试剂  14
    2.1.4 试剂配制  14-16
  2.2 方法  16-22
    2.2.1 试验技术路线  16
    2.2.2 L-02肝细胞的培养  16
    2.2.3 L-02肝细胞生存率测定  16-17
    2.2.4 五氯酚钠线粒体损伤检测  17-18
    2.2.5 五氯酚钠导致细胞氧化损伤检测(化学比色法)  18-20
    2.2.6 p53蛋白、AIF和细胞色素C的免疫印迹分析  20-22
  2.3 统计分析  22-23
第三章 结果  23-28
  3.1 五氯酚钠对L-02肝细胞存活率的影响  23-24
  3.2 五氯酚钠对L-02肝细胞线粒体的影响  24-25
    3.2.1 五氯酚钠对L-02肝细胞线粒体膜通透性转运孔(PTP)的影响  24
    3.2.2 五氯酚钠对L-02肝细胞线粒体膜电势△ψm的影响  24-25
  3.3 五氯酚钠对L-02肝细胞氧化与抗氧化系统的作用  25-26
  3.4 五氯酚钠对L-02肝细胞P53、细胞色素C和AIF蛋白水平的影响  26-28
第四章 分析与讨论  28-34
  4.1 五氯酚钠导致L-02肝细胞氧化损伤  28-29
  4.2 五氯酚钠诱导L-02肝细胞P53蛋白的表达  29-30
  4.3 五氯酚钠对L-02肝细胞线粒体的损伤  30-32
    4.3.1 五氯酚钠对线粒体膜通透性转运孔(PTP)的影响  30
    4.3.2 五氯酚钠导致L-02肝细胞线粒体膜电位的影响  30-31
    4.3.3 五氯酚钠导致L-02肝细胞线粒体释放细胞色素C  31-32
    4.3.4 五氯酚钠导致L-02肝细胞线粒体释放AIF  32
  4.4 五氯酚钠诱导肝细胞氧化应激和线粒体的损伤作用机制探讨  32-34
第五章 结论  34-35
参考文献  35-40
附录1  40-41
综述  41-54
  参考文献  48-54
致谢  54-55
攻读学位期间主要的研究成果  55

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 病理学 > 病理生理学
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