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黄牛卵母细胞和早期胚胎HAT1基因表达模式的研究

作　者: 公方强
导　师: 石德顺
学　校: 广西大学
专　业: 动物遗传育种与繁殖
关键词: 黄牛卵母细胞早期胚胎组蛋白乙酰化酶表达模式
分类号: S823
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要

组蛋白乙酰化和去乙酰化可以改变染色质的结构,参与基因的表达调控和重编程。组蛋白乙酰基转移酶1（Histone acetyltransferases 1,HAT1）主要在细胞质内对合成的组蛋白进行乙酰化修饰,调控组蛋白的乙酰化水平。因此,研究卵母细胞成熟过程及早期胚胎发育过程中HAT1基因的表达模式,对深入了解动物个体的发生机理具有重要意义。本研究首先以本地黄牛GV期卵母细胞mRNA为材料,根据黄牛在GenBank上的序列设计目的基因HAT1和内参基因SDHA的特异性扩增引物,通过反转录聚合酶链式扩增（RT-PCR）获得特异性扩增条带,经克隆测序验证,成功获得目的基因片段。HAT1和SDHA引物的扩增效率分别为106%和97%,可以用2^-△△Ct法对基因表达进行定量统计分析。然后,收集黄牛GV期卵母细胞、MⅡ期卵母细胞,体外受精（IVF）和孤雌激活（PA）方法得到2～4细胞、8～16细胞、桑椹胚和囊胚等实验材料,进行HAT1的实时定量PCR分析。结果发现,HAT1基因在黄牛GV期卵母细胞、MⅡ期卵母细胞、IVF胚胎2～4细胞、8～16细胞、桑葚胚和囊胚中的相对表达量分别为1.00、0.56、0.09、0.55、0.43和0.31,在PA胚胎2～4细胞、8～16细胞、桑葚胚和囊胚中的相对表达量分别为0.55、0.55、0.48和0.46。HAT1在GV期相对表达量最高,在IVF胚胎中2～4细胞表达量最少（P＜0.05）;在PA胚胎中,mRNA相对表达量相对稳定无明显波动。以上结果表明,早期胚胎HAT1基因的相对低表达可能与受精后的父源染色质重编程有关;PA胚胎HAT1基因的相对稳定表达可能与父源基因没有参与胚胎发育有关。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-8
第一章组蛋白乙酰化及组蛋白乙酰基转移酶的研究进展  8-24
  一、组蛋白乙酰化研究进展  8-19
    (一) 组蛋白研究概况  9-10
    (二) 组蛋白乙酰基转移酶(HATs)和去乙酰化酶(HDACs)  10-16
    (三) 组蛋白乙酰化作用  16-19
  二、组蛋白乙酰基转移酶1(HAT1)综述  19-22
    (一) HAT1的鉴定  20
    (二) HAT1的生化特征  20-21
    (三) HAT1对新合成的H4的乙酰化调节作用  21-22
    (四) HAT1临床意义  22
  三、本研究的目的和意义  22-24
第二章黄牛HAT1基因的克隆和实时定量PCR检测方法的建立  24-42
  1 材料与方法  25-35
  2 结果与分析  35-38
  3 讨论  38-41
  4 结论  41-42
第三章黄牛卵母细胞和早期胚胎HAT1基因表达的研究  42-50
  1 材料与方法  43-45
  2 结果与分析  45-48
  3 讨论  48-49
  4 结论  49-50
参考文献  50-58
附录  58-59
致谢  59-60
攻读学位期间发表论文情况  60

黄牛卵母细胞和早期胚胎HAT1基因表达模式的研究

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