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碳青酶烯类药物敏感性降低肠杆菌科菌的分子特征研究

作　者: 杨启文
导　师: 王辉；陈民钧；徐英春；张小江
学　校: 中国协和医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: 肠杆菌科菌碳青霉烯类药物耐药机制碳青霉烯酶外膜通道蛋白
分类号: R446.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

【目的】研究碳青霉烯类药物敏感性降低肠杆菌科菌的分子特征。【方法】收集2004-2008年我国16家教学医院的49株碳青霉烯类药物敏感性降低(亚胺培南或美罗培南或厄他培南的MIC≥2μg/ml)的肠杆菌科菌,采用对倍琼脂稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度；脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株的同源性；采用改良的Hodge试验和EDTA协同试验检测菌株产的碳青霉烯酶；接合试验检测耐药基因的可移动性；质粒提取试验分析菌株携带的质粒；聚合酶链式反应(PCR)检测包括碳青霉烯酶基因在内的多种β内酰胺酶基因、qnr基因、aac(6’)-Ib基因和整合子基因；对PCR阳性产物进行序列测定以确定基因型别；十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和外膜蛋白反转录RT-PCR分析菌株的外膜孔通道蛋白表达情况。【结果】49株研究菌株中,36株菌对亚胺培南中介或耐药(MIC>4μg/ml),31株菌对美罗培南中介或耐药(MIC>4μg/ml),47株菌对厄他培南中介或耐药(MIC>2μg/ml),45株菌和47株菌分别对替加坏素和多粘菌素敏感。PFGE显示菌株的同源性较低,仅部分菌株为克隆传播。16株菌检测出携带碳青霉烯酶基因：4株肺炎克雷伯菌和2株大肠埃希菌携带KPC-2型碳青霉烯酶基因(均为浙江省杭州市分离菌株),3株肺炎克雷伯菌、3株阴沟肠杆菌和2株弗劳地枸橼酸杆菌携带IMP-4型金属酶基因,2株肺炎克雷伯菌携带IMP-8型金属酶基因。49株临床分离菌株获得23株接合子,16株产碳青霉烯酶菌株中13株获得接合子。检测出的9种Ⅰ类整合子主要携带了介导菌株对甲氧苄啶和氨基糖苷类耐药的基因。产碳青霉烯酶的菌株如果合并通道蛋白缺失则可显示出更强的耐药性。在不产碳青霉烯酶的33株菌株中,29株菌的两种主要外膜蛋白(肺炎克雷伯菌的OmpK35和OmpK36,大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、产气肠杆菌和弗劳地枸橼酸杆菌的OmpF和OmpC)均不表达或表达降低,其中的28株还合并产ESBI和／或AmpC酶。对外膜蛋白的RT-PCR显示肺炎克雷伯菌的耐药性与OmpK35和OmpK36的合并表达量有关。【结论】大多数肠杆菌科菌对碳青霉烯类药物的中至高水平耐药由两种主要的外膜蛋白(OmpK35/36 or OmpF/C)同时缺失或表达降低合并产AmpC和／或ESBL引起。KPC-2、IMP-4或IMP-8等碳青霉烯酶的产生则与肠杆菌科菌对碳青霉烯类药物低至中度耐药相关。

全文目录

中文摘要  4-5
英文摘要  5-7
前言  7-8
第一部分碳青霉烯类药物敏感性降低肠杆菌科菌对抗菌药物的体外敏感性  8-15
  材料与方法  8-12
  结果  12-14
  讨论  14-15
第二部分菌株的分子流行病学研究  15-24
  材料与方法  15-22
  结果  22-23
  讨论  23-24
第三部分碳青霉烯酶的表型检测以及β内酰胺酶等耐药因子的基因型检测  24-36
  材料与方法  24-31
  结果  31-34
  讨论  34-36
第四部分碳青霉烯酶基因水平传播机制研究  36-42
  材料与方法  36-39
  结果  39-41
  讨论  41-42
第五部分外膜孔道蛋白的表达分析  42-61
  材料与方法  42-49
  结果  49-53
  讨论  53-61
参考文献  61-66
文献综述肠杆菌科细菌耐碳青霉烯类抗生素的研究进展  66-76
研究生期间发表的论文列表  76-78
附录  78-93
个人简历  93-97
致谢  97-98

碳青酶烯类药物敏感性降低肠杆菌科菌的分子特征研究

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