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鲍曼不动杆菌OXA基因的检测及ISAba1对其的影响

作　者: 孙艳霞
导　师: 聂大平
学　校: 大连医科大学
专　业: 临床检验诊断学
关键词: 鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶插入序列1 亚胺培南转化
分类号: R440
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:鲍曼不动杆菌是一种条件致病菌,广泛存在于自然界、医院环境及人体皮肤表面,因其对外界环境适应能力强,现已成为院内重要的条件致病菌之一。近年来随着广谱抗生素的过度使用,对β-内酰胺类、大环内酯类、氨基糖甙类、喹诺酮类乃至碳青霉烯类的多重耐药、泛耐药鲍曼不动杆菌在世界范围内均有报道,极易引起大规模流行,必须引起广大医疗工作者的高度重视。为了解大连地区多重耐药不动杆菌的流行情况、同源性及耐药机制,为临床用药提供有力依据,并且切实有效地控制院内感染的发生,我们对2008年~2009年于大连医科大学附属第二医院及大连市第三人民医院临床分离的110株多重耐药、泛耐药鲍曼不动杆菌进行同源性、OXA-碳青霉烯酶基因分布情况及插入序列1(ISAba1)对OXA-23基因表达情况的影响的探讨,并对其耐药机制进行初步研究。方法:收集临床分离的(其中92株来自大连医科大学附属第二医院,18株来自大连市第三人民医院)多重耐药、泛耐药的鲍曼不动杆菌无重复株110株(其中对亚胺培南敏感株为14株;耐药株为96株),标本来源于痰、血、尿、分泌物等,其中主要为痰标本。采用常规方法进行菌种鉴定,K-B纸片扩散法进行药敏试验。多重聚合酶链反应(multiplex polymerase chain reaction ,mPCR)扩增OXA-23-like、OXA-24-like、OXA-51-like、OXA-58-like,并送至大连宝生物工程公司进行序列测定;应用肠杆菌科基因组内重复序列ERIC-PCR进行同源性分析。选取不同来源的菌株用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)方法对应扩增OXA-23和ISAba1-OXA-23(12株);OXA-51和ISAba1-OXA-51基因(7株),并用大肠埃希菌TOP10作为感受态细胞转化OXA-23、ISAba1-OXA-23,琼脂稀释法测定阳性菌株和转化子TOP10(pGM-T-OXA)对亚胺培南的MIC值,并以大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853作为质控菌株。结果: 110株菌株中检测到单纯OXA-23基因9株(其中对亚胺培南耐药菌株为8株,耐药率为7.27%)、单纯OXA51基因12株(其中对亚胺培南耐药菌株为8株,耐药率为7.27%)、、单纯OXA-58基因2株,(均对亚胺培南敏感)、同时携带OXA-23和OXA-51两种基因83株(其中对亚胺培南耐药菌株为78株,耐药率为70.91%);检测到ISAba1-OXA-23基因(9株,阳性率为75%),未检测到blaOXA-24、ISAba1-OXA-51基因;OXA -碳青霉烯酶基因广泛存在于鲍曼不动杆菌中,主要以OXA-23(83.64%)、OXA-51(86.36%)为主,OXA-58(1.82)较为少见;110株鲍曼不动杆菌来自18个不同的克隆株,其中有一种类型的菌株爆发流行,占总实验菌株的46.36%,其它类型菌株散在发生;转化子TOP10(pGMISAba1-OXA-23)MIC值为0.5、另一转化子TOP10(pGMOXA-23)MIC值为0.125;TOP10(pGMOXA-51))MIC值为0.25,三者均未显示对亚胺培南高水平耐药的特性。结论:鲍曼不动杆菌在大连地区广泛流行,OXA-碳青霉烯酶基因广泛存在于鲍曼不动杆菌中,主要以OXA-23、OXA-51为主,OXA-58较为少见,尚未发现OXA-24;同时携带OXA-23和OXA-51两种基因的鲍曼不动杆菌在临床上较为多见; ISAba1位于OXA-23基因的上游;转化子MIC结果显示其并未对OXA酶的表达产生大的影响。

全文目录

一、摘要  6-10
  （一）中文摘要  6-8
  （二）英文摘要  8-10
二、正文  10-35
  （一）前言  10-11
  （二）材料与方法  11-18
  （三）结果  18-26
  （四）讨论  26-31
  （五）结论  31-32
  （六）参考文献  32-35
三、综述  35-45
  （一）正文  35-42
  （二）参考文献  42-45
四、致谢  45

鲍曼不动杆菌OXA基因的检测及ISAba1对其的影响

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