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宫颈上皮内瘤变及宫颈鳞癌中Cyclin D1、Ki-67的表达与HPV感染相关性的研究

作　者: 杨德桂
导　师: 张晓薇
学　校: 广州医学院
专　业: 妇产科学
关键词: 宫颈上皮内瘤变 宫颈鳞癌 人乳头瘤病毒 细胞周期蛋白 D1 增殖细胞核抗原
分类号: R737.33
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 74次
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内容摘要


宫颈鳞癌(Squamous cell carcinoma of cervical cancer)是常见的妇科恶性肿瘤,其发生发展可能由多种致癌因素引起。近年来的研究表明,高危型的人乳头瘤病毒(human pappilloma virus HPV)与宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia CIN)和宫颈鳞癌的发生密切相关,但对其具体机制尚未明了。20世纪90年代以来,随着对肿瘤研究的不断深入,发现细胞增殖和细胞调亡对维持正常细胞的稳定性至关重要,细胞增殖能力的异常改变和细胞周期调节异常及细胞调亡调节机制的失控,与癌变过程密切相关。细胞周期G1期到S期转换点是细胞周期调节过程中的一个关键环节,细胞周期蛋白D1(Cell cycle protein D1 Cyclin D1)是调节这一关键的细胞周期G1期向S期转换的重要正性调节因子,Cyclin D1表达增强可反映细胞增殖加速。另外,增殖细胞核抗原(Proliferation cell nuclear antigen Ki-67)是目前已知的增殖抗原中最能反映细胞增殖能力蛋白标志物,可辅助用于鉴别疾病良、恶性以及评估预后及疗效等指标。但Cyclin D1、Ki-67在宫颈鳞癌发生发展中的作用尚不清楚。本研究通过了解Cyclin D1、Ki-67在CIN及宫颈鳞癌发病的相关性及Cyclin D1、Ki-67与HPV感染之间的相互关系,以探讨Cyclin D1、Ki-67在CIN及宫颈鳞癌发病中的作用,探讨其能否作为预测CIN预后的指标之一。目的:1.探讨Cyclin D1、Ki-67在CIN及宫颈鳞癌的发生及发展中的作用。2.了解Cyclin D1、Ki-67与HPV感染之间的相关性,以探讨Cyclin D1、Ki-67蛋白表达能否作为预测CIN预后的指标之一。方法:1、研究对象:选取北京大学深圳医院2003年1月-2008年6月病理确诊为CINⅠ-CINⅢ级及宫颈鳞癌的患者176例(其中CINⅠ组57例、CINⅡ51例、CINⅢ39例、宫颈鳞癌29例),同期选取宫颈活检病理确诊为正常上皮或柱状上皮异位30例为对照组。所有患者术前进行常规妇检,液基细胞学检查、高危型HPV检查、阴道镜下活检, CIN的标准参照Richard CIN分级。2、方法:应用免疫组化(Immunohistochemical assay, IHC)Elivision plus法检测宫颈病变组织中Cyclin D1、Ki-67蛋白的表达,结果判断:采用CMIAS007真彩色医学图像分析系统(软件由空军总医院和北京航空航天工业大学联合研制)。根据图像分析所得吸光度进行分级评分:<5%为阴性(-),5~25%为弱阳性(+),25~50%为阳性(++),≥50%为强阳性(+++)。应用杂交捕获二代(Hybrid capture2 ,HC2)检测宫颈分泌物中HPV感染的情况,结果判断:阳性对照的均值为临界值,标本读数与临界值比值≥1为阳性,<1为阴性,3孔阴性对照标准差要<15%、3孔阳性对照标准差必须<25%,阳性对照均值与阴性对照均值比值必须>2.0。统计学分析运用SPSS13.0统计软件包建立数据库,录入所有实验数据后进行统计分析。计数资料的统计描述用率或构成比表示,不同组间率或构成比的差异性用X2检验等级资料的差异性用非参数检验。计量资料的统计描述用均数±标准差表示,两组间均数的比较用独立样本的t检验,等级资料间的相关性用Spearman等级相关分析。以P<0.05作为差异的标准。结果:一、Cyclin D1蛋白在各组宫颈组织的细胞核及细胞浆中表达:1、Cyclin D1在对照组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ及宫颈鳞癌组细胞浆及细胞核中表达的阳性率分别为96.67%,87.72%,90.2%,92.31%及44.83%。对照组以弱阳性表达为主(见附图1),CINⅠ组以弱阳性及阳性表达为主(见附图2),CINⅠ组与对照组比较差异无统计学意义(z=-1.7,P=0.089),CINⅡ组以弱阳性表达为主(见附图3),CINⅡ组与对照组比较差异无统计学意义(z=-0.145,P=0.884),CINⅡ组与CINⅠ组比较差异有统计学意义(z=-2.031,P<0.05),CINⅢ组阳性表达(见附图4),CINⅢ组与对照组比较差异有统计学意义(z=-3.311,P <0.05),CINⅢ组与CINⅡ级比较差异有统计学意义(z=-3.701,P<0.05) CINⅢ与CINⅠ比较差异无统计学意义(z=-1.605,P=0.109)。2、宫颈鳞癌组Cyclin D1明显下调(见附图5),阳性率仅为44.8%,阳性表达强度最低,与对照组及各组CIN组比较差异均有统计学意义(与对照组比较z=-3.568,P <0.05;与CINⅠ组比较z=-4.119,P <0.05;与CINⅡ组比较z=-3.640,P <0.05;与CINⅢ组比较z=-4.661,P <0.05)。3、各组级别与Cyclin D1蛋白表达相关分析,相关系数r=-0.128,P=0.07,不同级别与Cyclin D1表达无相关性。二、Ki-67蛋白在各组宫颈组织细胞的细胞核的表达:1、Ki-67蛋白在对照组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ及宫颈鳞癌组细胞核中的表达阳性率分别为93.33%,91.23%,90.20%,100%,96.55%;对照组Ki-67蛋白表达呈弱阳性表达为主(见图6),CINⅠ组阳性表达为主(见图7),CINⅠ组与对照组比较差异有统计学意义(z=-2.970 P <0.05),CINⅡ组弱阳性和阳性表达为主(见图8),CINⅡ组与对照组差异无统计学意义(z=-0.075 ,P=0.94),CINⅡ组与CINⅠ组比较差异有显著意义(z=-3.197 P <0.05),CINⅢ组阳性和强阳性表达为主(见图9),CINⅢ组与对照组比较差异有统计学意义(z=-3.927,P <0.05 )CINⅢ组与CINⅡ比较差异有统计学意义(z=-4.133, P <0.05),CINⅢ组与CINⅠ组比较差异无统计学意义(z=-0.769, P= 0.442)。2、在宫颈鳞癌组中Ki-67表达明显增强(见图10),宫颈鳞癌组与对照组比较(z=-5.243 ,P <0.05);与CINⅠ组比较(z=-3.476,P <0.05);与CINⅡ组比较(z=-5.578,P<0.05);与CINⅢ组比较(z=-3.032 ,P<0.05)差异均有统计学意义。3、各组级别与Ki-67蛋白表达相关分析,相关系数r=0.301,P<0.05。三、高危型HPV的检测结果:高危型HPV在对照组、CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组、宫颈鳞癌组中表达阳性率分别为0%、52.63%、58.82 %、82.05%、100%,CINⅡ级组与CINⅠ级组比较无统计学差异,其余各组间差异均有统计学意义。四、Cyclin D1与高危型HPV感染的相关分析中,相关系数r=-0.115,P=0.103,两者无相关性。Ki-67与高危型HPV感染的相关分析中,相关系数r=0.228,P<0.05,提示两者有相关性。结论:1.从柱状上皮异位→CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ→宫颈鳞癌发展过程中,Ki-67蛋白阳性表达呈逐渐升高趋势,Ki-67蛋白表达有可能作为子宫颈上皮内瘤变预后预测指标之一。2.从柱状上皮异位→CINⅠ→CINⅡ→CINⅢ发展过程中,Cyclin D1蛋白的表达未见明显的相关性,但Cyclin D1蛋白的表达在宫颈鳞癌明显下调。3.宫颈组织ki-67蛋白表达与高危型HPV感染之间存在明显的相关性,ki-67蛋白表达有可能作为反映高危型HPV感染患者的CIN预后指标。4.在CIN和宫颈鳞癌的发展过程中,宫颈组织Cyclin D1的表达与高危型HPV感染之间未见明显的相关性,可能与高危型HPV感染患者CIN预后的预测无关。

全文目录


中英文对照  3-4
中文摘要  4-8
ABSTRACT  8-11
前言  11-14
材料与方法  14-19
  一、临床资料收集  14
  二、主要仪器  14
  三、主要试剂  14-15
  四、标本的采集  15
  五、Elivision plus 免疫组化染色步骤  15-16
  六、HPV 的检测  16-18
  七、统计学分析  18-19
结果  19-23
讨论  23-26
结论  26-27
本研究的局限性  27-28
参考文献  28-31
附图  31-34
致谢  34-35

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 女性生殖器肿瘤 > 子宫肿瘤
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