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肿瘤蛋白p185的纯化及乳腺癌患者血清中p185蛋白BA-ELISA检测方法的建立

作　者: 王弦
导　师: 宋礼华；徐振山
学　校: 安徽医科大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 乳腺癌 单克隆抗体 免疫组化 亲和层析 BA-ELISA 细胞表面表位包埋法(SEM)
分类号: R737.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的从转染Her-2/neu基因的T6-17细胞上清中纯化p185蛋白作为阳性抗原对照,利用生物素-亲和素酶联免疫法(Biotin-Avidin ELISA,BA-ELISA法)检测乳腺癌患者血清中p185蛋白,探讨血清p185蛋白在乳腺癌诊断中的意义。方法采用溴化氰活化的Sepharose 4B为基质,通过交联A18 mAb,用亲和层析的技术纯化p185蛋白。将收集的T6-17细胞上清循环过亲和层析柱,经醋酸溶液解离与抗体结合的p185蛋白,收集到蛋白洗脱峰,浓缩后用ELISA检测p185的免疫反应性,并经SDS-PAGE和Western blot进一步鉴定。利用自备的生物素化Her-2/neu单克隆抗体,并利用亲和层析法从T6-17细胞培养上清中纯化的p185蛋白作为阳性对照,采用BA-ELISA方法对乳腺癌和正常对照血清进行p185蛋白检测,同时对乳腺癌患者组织进行p185蛋白免疫组化染色,并对实验结果进行统计学分析。结果从转基因细胞上清中成功获取p185肿瘤抗原;用BA-ELISA方法检测了122例乳腺癌患者血清,血清p185阳性数为39例,检测了110例正常人血清,血清p185阳性数为0例;122例乳腺癌患者中免疫组化p185阳性数为43例,其中血清p185升高38例。结论初步建立了乳腺癌患者血清中p185蛋白的BA-ELISA检测方法,结果显示患者血清中p185蛋白对乳腺癌具有重要的诊断意义,血清p185蛋白和组织p185蛋白呈高度相关。

全文目录


缩略词表  5-6
中文摘要  6-7
英文摘要  7-9
第一部分 ( T6 - 17 细胞培养上清中肿瘤蛋白p 185 的纯化及鉴定  9-28
  1. 前言  9-11
  2. 材料与方法  11-22
  3. 结果  22-25
  4. 讨论  25-27
  5. 结论  27-28
第二部分( 乳腺癌患者血清中p 1 8 5 蛋白 B A - E L I s A 检测方法的建立  28-47
  1. 前言  28-31
  2. 材料与方法  31-38
  3. 结果  38-42
  4. 讨论  42-46
  5. 结论  46-47
参考文献  47-50
致谢  50-51
附录  51-53
综述 ( Her - 2 / neu 基因在乳腺癌中的研究进展)  53-60
  1 Her-2/neu 的命名和基因结构  54
  2 Her-2/neu 的激活、信号转导和肿瘤的发生机制  54-56
  3 Her-2/neu 与乳腺癌的关系  56
  4 Her-2/neu 检测的常用方法  56-57
  5 乳腺癌的靶向治疗  57-58
  6 结语  58-59
  参考文献  59-60

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 乳腺肿瘤
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