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Curcumin通过抑制GSK-3β的活性激活Wnt/β-catenin通路防治AD的体外研究

作　者: 张雄
导　师: 李昱
学　校: 重庆医科大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 阿尔茨海默病姜黄素糖原合成激酶-3β β-链蛋白淀粉样蛋白
分类号: R749.16
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的:在AD发生和发展的过程中,Wnt/β-catenin信号传导通路发挥了重要的作用。本课题旨在通过体外研究GSK-3β的选择性抑制剂——Curcumin对与Win/β-catenin通路密切相关的因子GSK-3β、β-catenin和CyclinD1表达的影响,以及对Aβ产生的影响,探讨其发挥作用的机制,为Curcumin有效的治疗AD提供新的理论证据。方法:体外培养神经系细胞SHSY5Y,以Lipofectamin^TM2000脂质体介导瞬时共转染pBACE1-mychis和pAPPswe两种质粒,Curcumin分浓度梯度（0、1.25、5.0、20.0μmol/L）处理24h,以及5.0μmol/LCurcumin按时间梯度（0、12、24、48h）处理,然后通过RT-PCR检测GSK-3β、β-catenin和CyclinD1 mRNA水平,Western blot检测GSK-3β、β-catenin和CyclinD1以及磷酸化形式GSK-3β-Ser9蛋白表达情况,免疫荧光方法检测GSK-3β和β-catenin在细胞内的定位和蛋白的表达变化情况,最后ELISA检测Aβ40/42水平。结果:RT-PCR和Western blot结果显示,经Curcumin处理后,转染的SHSY5Y细胞内GSK-3βmRNA和蛋白表达水平都显著减弱,呈浓度-时间依赖性（P＜0.05）;而GSK-3β的磷酸化形式GSK-3β-Ser9蛋白水平却明显增加;β-catenin mRNA和蛋白水平也增加,其转录因子CyclinD1的mRNA以及蛋白表达水平也显著增加,呈浓度-时间依赖性（P＜0.05）。免疫荧光染色结果不但证实了GSK-3β、β-catenin在细胞浆内量的变化,而且还发现随着药物浓度的增加,β-catenin逐渐向细胞核内转移。ELISA检测到的Aβ40、Aβ42表达水平都明显降低,呈现浓度-时间依赖性,其中以Aβ42降低更明显（P＜0.05）。结论:GSK-3β是一个潜在性的AD治疗靶点,Curcumin发挥其作用主要是通过抑制GSK-3β的活性,促进β-catenin和转录因子之一CyclinD1的表达,激活了Wnt/β-catenin信号通路,并抑制了Aβ的生成。本研究结果将为Curcumin防治神经变性疾病提供新的思路。

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英汉缩略语名词对照  5-7
中文摘要  7-9
英文摘要  9-11
论文正文:Curcumin通过抑制GSK-3β的活性激活Wnt/β-catenin通路防治AD的体外研究  11-45
  前言  11-13
  1 材料与仪器  13-19
  2 实验方法  19-29
  3 结果  29-40
  4 讨论  40-45
参考文献  45-48
文献综述  48-57
  参考文献  54-57
致谢  57-58
攻读硕士学位期间发表的学术论文目录  58

Curcumin通过抑制GSK-3β的活性激活Wnt/β-catenin通路防治AD的体外研究

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