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富含谷胱甘肽面包酵母菌株的选育

作　者: 时丽萍
导　师: 肖冬光
学　校: 天津科技大学
专　业: 微生物与生化药学
关键词: 面包酵母 谷胱甘肽 氮离子注入技术 诱变育种
分类号: Q93
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
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内容摘要


本论文对谷胱甘肽的提取方法进行了比较和优化,通过复合诱变育种筛选到了富含谷胱甘肽的酵母菌株、并进一步对发酵培养基和发酵条件进行了优化。通过对谷胱甘肽测定方法的重现性试验,证明此方法重现性好,准确度高,是测定酵母中谷胱甘肽合适的测定方法。对两种谷胱甘肽提取方法的比较表明:热水抽提法更适合提取酵母胞内谷胱甘肽。进一步对热水抽提法的提取条件进行了优化,优化后的条件为:温度90～95℃,时间8min,pH自然,提取液量40mL。对15株酵母菌的菌体干重及谷胱甘肽产量、含量进行了比较,确定了面包酵母BY-14作为诱变出发菌株。对该菌株进行紫外诱变,以ZnCl2为筛子进行筛选,获得了一株诱变效果较好的菌株B-3,谷胱甘肽产量达到78.23 mg/L,比出发菌株提高了12%;谷胱甘肽含量达到14.82mg/g,比出发菌株提高了11%。采用均匀分析法优化了突变株B-3的发酵培养基。在此基础上,优化了摇瓶分批发酵条件。与初始条件相比,在优化条件下菌株B-3发酵生产谷胱甘肽的产量为96.72mg/L,比优化前提高了23.63%,谷胱甘肽含量为18.96mg/g,比优化前提高了28%。以提高突变株B-3的谷胱甘肽产量为目的,采用低能氮离子注入技术,以乙硫氨酸抗性筛选法进行了诱变选育研究。获得了一株具有乙硫氨酸抗性的突变株BL-23,该菌株谷胱甘肽产量比出发菌株提高了17.3%,达到113.46 mg/L;谷胱甘肽含量达到20.86mg/g,比出发菌株提高了10%。

全文目录


摘要  4-5
ABSTRACT  5-8
1 前言  8-20
  1.1 食用酵母概述  8-12
    1.1.1 酵母的营养意义  8
    1.1.2 食品酵母概念及产品种类  8-9
    1.1.3 食用酵母的营养价值  9-10
    1.1.4 国内外生产与研究概况  10-12
  1.2 谷胱甘肽概述  12-14
    1.2.1 谷胱甘肽的生理功能与营养价值  12-13
    1.2.2 谷胱甘肽在酵母体内的代谢途径  13
    1.2.3 谷胱甘肽的应用  13-14
    1.2.4 谷胱甘肽的测定方法  14
  1.3 富含谷胱甘肽面包酵母菌株的选育  14-18
    1.3.1 面包酵母的种类  14-15
    1.3.2 面包酵母的工业生产  15-16
    1.3.3 富含谷胱甘肽酵母菌株的选育  16-18
  1.4 本论文的立题依据与研究内容  18-20
    1.4.1 立题依据  18-19
    1.4.2 研究内容  19-20
2 材料与方法  20-27
  2.1 材料与仪器  20-22
    2.1.1 菌种  20
    2.1.2 主要试验材料  20-21
    2.1.3 主要仪器设备  21
    2.1.4 主要试剂  21
    2.1.5 培养基  21-22
  2.2 分析方法  22-23
    2.2.1 细胞生物量的测定  22
    2.2.2 胞内谷胱甘肽含量的测定  22-23
    2.2.3 pH值的测定  23
  2.3 实验方法  23-27
    2.3.1 培养方法  23
    2.3.2 谷胱甘肽的提取  23
    2.3.3 生长曲线的绘制  23-24
    2.3.4 紫外诱变育种及筛选方法  24
    2.3.5 离子注入诱变育种及筛选方法  24-25
    2.3.6 金属离子的影响——均匀设计  25-27
3 结果与讨论  27-48
  3.1 谷胱甘肽测定方法的验证  27-30
    3.1.1 样品含量的测定  27
    3.1.2 谷胱甘肽提取方法的确定  27
    3.1.3 热水提取条件的优化  27-30
  3.2 出发菌株的确定  30-31
  3.3 富含谷胱甘肽酵母菌株的紫外诱变选育  31-34
    3.3.1 面包酵母菌株的生长曲线  31-32
    3.3.2 紫外线照射剂量的选择  32-33
    3.3.3 初筛平板药物浓度的确定  33
    3.3.4 抗氯化锌菌株的筛选  33-34
  3.4 突变株发酵条件的研究  34-44
    3.4.1 培养基成分的优化  34-41
    3.4.2 培养条件的优化  41-44
    3.4.3 优化条件下谷胱甘肽含量产量的测定  44
  3.5 离子注入诱变选育富含谷胱甘肽酵母菌株  44-46
    3.5.1 氮离子(N~+)注入对B-3菌株存活率的影响  44-45
    3.5.2 出发菌株乙硫氨酸最小抑制浓度(MIC)测定  45
    3.5.3 诱变前后菌株在含致死浓度平板上的生长情况  45-46
    3.5.4 抗乙硫氨酸突变株的筛选  46
  3.6 菌株诱变前后谷胱甘肽含量、产量的比较  46-47
  3.7 遗传稳定性实验  47-48
4 结论  48-49
5 展望  49-50
6 参考文献  50-55
7 论文发表情况  55-56
8 致谢  56

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中图分类: > 生物科学 > 微生物学
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