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乌饭树树叶水提物功能性的研究

作　者: 章海燕
导　师: 张晖
学　校: 江南大学
专　业: 食品科学
关键词: VBTL 水提物糖尿病抑菌黄酮多糖
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

本论文主要研究了乌饭树树叶(VBTL)水提物的功能性。首先研究了VBTL水提物对STZ诱导的糖尿病小鼠的作用。动物实验结果表明VBTL水提物对STZ诱导的糖尿病小鼠有改善作用。灌胃四周后水提物组糖尿病小鼠的体重增加了61%,血糖降低了14.18%,胰岛素含量明显增加,血脂含量明显降低且水提物对小鼠的内脏器官没有影响。采用二倍稀释法和管碟法对VBTL水提物进行体外抑菌试验,研究了VBTL水提物的抑菌作用及其最小抑菌浓度(MIC)。结果发现,VBTL水提物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的抑菌圈大小分别为12.6±0.6mm,9.9±0.1mm和8.1±0.6mm,但对霉菌和酵母的抑制效果不明显。VBTL水提物对金黄色葡萄球菌的MIC为7.65 mg/mL,对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的MIC均为15.30mg/mL。根据VBTL水提物的成分及一些抑菌和糖尿病方面的相关研究,推测抑菌作用的有效成分为黄酮,对糖尿病作用的有效成分为多糖。通过Box-Benhnken中心组合实验和响应面分析法,得到了VBTL水溶性黄酮提取的最佳工艺条件:料水比1:40,提取时间2h,提取温度50℃,提取次数2次,此时其得率为16.82mg/g。采用二倍稀释法和管碟法对VBTL水溶性黄酮进行体外抑菌试验,主要研究了VBTL水溶性黄酮的抑菌作用及其最小抑菌浓度。结果表明VBTL水溶性黄酮提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的抑菌圈大小分别为24.6±0.6mm,22.9±0.5mm和18.5±0.9mm,但对霉菌和酵母的抑制效果不明显。VBTL水溶性黄酮提取液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌的MIC分别为1.03mg/mL、2.06mg/mL和4.12mg/mL。将VBTL水溶性黄酮提取物的抑菌效果和山梨酸钾和苯甲酸钠的抑菌效果进行了比较,发现其抑菌效果要好于山梨酸钾和苯甲酸钠的抑菌效果。利用管碟法研究了不同处理温度对VBTL水溶性黄酮提取物的抑菌作用的影响以及VBTL水溶性黄酮提取物和葡萄糖或NaCl的协同抑菌作用。实验结果表明随温度的升高黄酮提取物的抑菌效果先增强后减弱。在抑菌作用上黄酮提取物和葡萄糖或NaCl有较强的协同抑菌作用。对VBTL水溶性黄酮提取物的杀菌时间和黄酮提取物的抑菌机理进行了研究。杀菌时间实验结果表明浓度为1×MIC,3×MIC黄酮提取液对金黄色葡萄球菌的杀菌时间都为12h,而浓度为5×MIC黄酮提取液对金黄色葡萄球菌的杀菌时间为7h。浓度为3×MIC,5×MIC黄酮提取液对枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的杀菌时间都为12h。抑菌机理的实验结果表明VBTL水溶性黄酮提取物的抑菌机理之一为破坏了细胞膜的结构,影响了细胞的生理活性从而起到了抑菌作用。通过Box-Benhnken中心组合实验和响应面分析法,得出VBTL水溶性糖提取的最佳工艺条件:提取温度65℃,提取时间2.5h,pH值9.5,料水比1:45,此时糖的得率为89.80mg/g。再利用单因素实验确定乙醇醇沉VBTL水溶性多糖的最佳工艺条件为:提取液和乙醇的体积比1:5,乙醇体积分数90%,乙醇醇沉静置时间6h,醇沉2次,此时多糖得率为36.55mg/mL。通过对四种大孔树脂的脱色效果进行研究,选择AB-8型大孔树脂对VBTL水溶性多糖进行脱色。通过对AB-8型大孔树脂脱色的静态吸附条件进行研究,确定了VBTL水溶性多糖脱色的最佳静态吸附条件为:树脂添加量8%,溶液pH2,作用温度35℃,作用18h,此时多糖保留率为82.03%、脱色率为88.11%、蛋白脱除率为78.35%。利用DEAE-Sepharose FF柱对脱色后的多糖进行进一步纯化,结果表明经过DEAE-Sepharose FF柱分离后得到两种多糖成分。

全文目录

摘要  5-7
ABSTRACT  7-9
主要缩略词总汇  9-10
1 引言  10-14
  1.1 乌饭树树叶(VBTL)的概述  10
  1.2 VBTL 的研究现状  10-11
    1.2.1 VBTL 提取物抗氧化性的研究  10
    1.2.2 VBTL 提取物抑菌作用的研究  10-11
    1.2.3 VBTL 提取物抗肿瘤作用的研究  11
    1.2.4 VBTL 提取物抗疲劳作用的研究  11
  1.3 多糖对糖尿病作用的研究进展  11-12
  1.4 黄酮抑菌作用的研究进展  12
    1.4.1 黄酮类化合物抑菌活性的构效关系  12
    1.4.2 黄酮类化合物的抑菌作用  12
  1.5 立题背景和意义  12-13
  1.6 论文主要研究内容  13-14
2 实验材料与方法  14-20
  2.1 实验材料  14
  2.2 仪器与设备  14-15
  2.3 实验方法  15-20
    2.3.1 原料的成分测定  15
    2.3.2 VBTL 水提物对STZ 诱导的糖尿病小鼠的作用  15-16
    2.3.3 VBTL 水提物抑菌作用的研究  16-17
    2.3.4 VBTL 水提物功能性的有效成分确定  17
    2.3.5 VBTL 水溶性黄酮的提取工艺  17
    2.3.6 VBTL 水溶性黄酮提取物的抑菌作用  17-18
    2.3.7 VBTL 水溶性多糖的提取分离工艺  18-19
    2.3.8 VBTL 水溶性多糖的初步纯化  19-20
3 实验结果与讨论  20-40
  3.1 原料基本成分的测定结果  20
  3.2 VBTL 水提物对STZ 诱导的糖尿病小鼠作用的结果  20-22
    3.2.1 VBTL 水提物对糖尿病小鼠体重的影响  20
    3.2.2 VBTL 水提物对糖尿病小鼠血糖的影响  20-21
    3.2.3 VBTL 水提物对糖尿病小鼠血脂成分和胰岛素含量的影响  21
    3.2.4 VBTL 水提物对糖尿病小鼠内脏器官重量的影响  21-22
  3.3 VBTL 水提物抑菌作用的研究  22-23
    3.3.1 VBTL 水提物的抑菌能力的测定  22
    3.3.2 VBTL 水提物MIC 的测定  22-23
  3.4 VBTL 水提物成分分析  23
  3.5 VBTL 水溶性黄酮的提取工艺  23-27
    3.5.1 标准曲线的制作  23
    3.5.2 单因素试验结果  23-24
    3.5.3 响应面法优化VBTL 水溶性黄酮的提取工艺  24-27
  3.6 VBTL 水溶性黄酮提取物抑菌作用的研究  27-32
    3.6.1 VBTL 水溶性黄酮提取物的抑菌能力的测定  27-28
    3.6.2 VBTL 水溶性黄酮提取物、山梨酸钾和苯甲酸钠的抑菌活性的比较  28-29
    3.6.3 不同温度处理对VBTL 水溶性黄酮提取物抑菌活性的影响  29
    3.6.4 VBTL 水溶性黄酮提取物与NaCl 或葡萄糖的协同抑菌作用的研究  29-30
    3.6.5 VBTL 水溶性黄酮提取物对细菌作用时间与抑菌率的关系  30
    3.6.6 不同浓度VBTL 水溶性黄酮提取物杀菌时间试验  30-31
    3.6.7 VBTL 水溶性黄酮提取物抑菌机理的初探  31-32
  3.7 VBTL 水溶性多糖的提取分离工艺研究  32-37
    3.7.1 糖的标准曲线的制作  32
    3.7.2 单因素试验结果  32-33
    3.7.3 Box-Behnken 中心设计及响应面法优化VBTL 水溶性糖的提取工艺  33-36
    3.7.4 VBTL 水溶性多糖的分离试验  36-37
  3.8 VBTL 水溶性多糖的纯化  37-40
    3.8.1 大孔树脂的选择  37
    3.8.2 AB-8 脱色静态吸附条件的选择  37-38
    3.8.3 DEAE-Sepharose FF 柱对脱色VBTL 水溶性多糖进一步纯化  38-40
主要结论  40-41
致谢  41-42
参考文献  42-48
附录Ⅰ：作者在攻读硕士学位论文期间主要发表的文章  48

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