学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

阳离子—氯离子共转运体KCC2和NKCC1在PCPA致失眠模型大鼠脑干中的表达变化

作　者: 蔺芳菊
导　师: 杨晓苏
学　校: 中南大学
专　业: 神经病学
关键词: 失眠阳离子-Cl~-共转运体(CCC) KCC2 NKCC1 脑干苯二氮卓类
分类号: R740
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 180次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载

内容摘要

研究背景及目的失眠是最为常见的一种睡眠障碍,是多种躯体、精神和行为疾病所具有的常见临床表现,但其确切的发生机制至今仍不明了。对睡眠发生的相关解剖结构研究发现,觉醒与睡眠主要与脑干的网状结构有关,其有睡眠诱导功能的脑干网状抑制系统(ascendingreticular inhibitory system,ARIS)。神经系统内阳离子-Cl~-共转运体(cation-chloride cotransporters,CCCs)是一个非常重要的影响和维持Cl~-浓度平衡的家族。目前报道的七种阳离子-Cl~-共转运体中,神经系统内仅表达KCC1、KCC2、KCC3和NKCC1四种,其中,K~+-Cl~-共转运体2(K~+-Cl~-cotransporter 2,KCC2)负责将神经元内Cl~-向外转运,而Na~+,K~+-2Cl~-共转运体1(Na~+,K~+-2Cl~-cotransporter1,NKCC1)则负责将胞外的Cl~-向胞内转运,二者构成一对平衡体,从而维持神经元内Cl~-浓度的稳定和平衡。阳离子-Cl~-共转运体的功能异常,可引起中枢神经系统的Cl~-的浓度异常,进而导致临床上多种神经系统疾病,如癫痫和持续性疼痛等,提示阳离子-Cl~-共转运体可能通过影响GABA能神经元,在神经兴奋/抑制的平衡中扮演了重要角色,而失眠正是一种神经兴奋/抑制功能失衡导致的临床疾病。作为经典的治疗失眠的药物,地西泮(安定)等属苯二氮卓受体激动剂,它们可通过促进GABA与GABA_A受体的结合而使Cl~-通道开放的频率增加,更多的Cl~-内流,引起突触膜超极化,产生快抑制性突触后电位(inhibitory postsynaptic potential,IPSP),而发挥神经抑制功能。而这个过程中,阳离子-Cl~-共转运体KCC2和NKCC1会发生什么同步变化呢?目前国内外尚未见相关报道。本研究拟采用腹腔注射PCPA制成大鼠失眠模型,并同步设立生理盐水对照组和地西泮干预组,分别检测各组大鼠脑干组织中KCC2mRNA和NKCC1 mRNA的表达变化,并检测细胞内氯离子浓度,以探讨其在失眠发病机制中的作用。方法1.动物分组及处理:采用清洁级成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠为实验对象,随机分为3组,模型组:按照用量PCPA 300mg/Kg,用略碱性生理盐水(pH:7-8)溶解PCPA配制成混悬液,予以腹腔注射1ml/100g,每日1次,8:30-9:00 AM,连续2天,制作实验性失眠大鼠模型;对照组:与模型组同步对照,以生理盐水代替PCPA腹腔注射;干预组:自PCPA造模之后,按照地西泮片0.92mg/Kg的剂量,用蒸馏水溶解地西泮片配制成9.2%水溶液,予以灌胃,每日一次,9:00-9:30 AM,连续5天。2.将各组受试动物于治疗后第6天断头处死,取大鼠脑干组织,液氮内保存。3.RT-PCR法半定量检测大鼠脑干KCC2和NKCC1 mRNA的表达。4.用氯离子荧光探针MQAE,结合激光共聚焦显微镜检测脑干组织细胞内Cl~-浓度及变化。结果1.与对照组相比,模型组KCC2mRNA表达明显降低(P＜0.01),干预组较模型组表达增加(P＜0.01),但仍低于对照组(P＜0.01)。2.与对照组相比,模型组NKCC1mRNA表达稍增加,但无显著性差异(P＞0.05),干预组较对照组和模型组均降低(P＜0.01)。3.与对照组相比,模型组细胞内氯离子浓度升高(P＜0.01),干预组较模型组降低(P＜0.01),但仍较对照组高,差异无显著性(P＞0.05)。结论1、脑干KCC2 mRNA表达下调及细胞内Cl~-浓度的升高可能与失眠的发病有关。2、地西泮可能通过上调KCC2 mRNA和下调NKCC1 mRNA的表达,以及降低细胞内Cl~-浓度而发挥镇静催眠的作用。

全文目录

中文摘要  4-7
ABSTRACT  7-10
目录  10-11
缩略词表  11-12
第一章前言  12-15
第二章实验材料  15-17
  2.1 主要试剂  15
  2.2 主要仪器与设备  15-17
第三章实验方法  17-22
  3.1 研究对象  17
  3.2 实验动物分组  17
  3.3 PCPA实验性失眠大鼠模型制作的评估  17
  3.4 组织取材  17-18
  3.5 RT-PCR检测组织内KCC2和NKCC1 mRNA的表达  18-19
  3.6 氯离子荧光探针MQAE检测细胞内氯离子浓度  19-21
  3.7 统计学分析  21-22
第四章结果  22-29
  4.1 大鼠行为学变化  22
  4.2 大鼠体重变化  22-23
  4.3 总RNA样品质量检测  23-24
  4.4 各组KCC2 mRNA的表达及比较  24-25
  4.5 各组NKCC1 mRNA表达及比较  25-26
  4.6 各组细胞内氯离子的浓度及比较  26-29
第五章讨论  29-33
第六章结论  33-34
参考文献  34-38
综述  38-52
致谢  52

阳离子—氯离子共转运体KCC2和NKCC1在PCPA致失眠模型大鼠脑干中的表达变化

内容摘要

全文目录

相似论文