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PBR在PCPA致失眠大鼠脑干中的表达
作 者: 杨德
导 师: 杨晓苏
学 校: 中南大学
专 业: 神经病学
关键词: 失眠 PCPA PBR 脑干
分类号: R740
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
目的本研究拟采用腹腔注射对氯苯丙氨酸(p-chlorophenylalanine, PCPA)制作失眠大鼠模型,同步设立生理盐水对照组和地西泮干预组,通过行为学、体重的观察及检测大鼠脑干组织中PBR mRNA和蛋白的表达变化,初步探讨其与失眠的关系。方法1.动物分组及处理:采用36只清洁级健康雄性SD大鼠为实验对象,鼠龄8-10周,体重180-220g。随机分为模型组、对照组和干预组,每组12只。①模型组:每日上午8:30~9:00腹腔注射PCPA(300mg/kg)制作失眠大鼠模型,连续2天。其中PCPA用生理盐水(pH:7-8)溶解,按1ml/100g配制成混悬液。第三天以蒸馏水按0.1ml/Kg灌胃,连续5天;②对照组:每日上午8:30~9:00以生理盐水按0.1ml/Kg进行腹腔注射,连续2天,第三天以蒸馏水按0.1ml/Kg灌胃,连续5天;⑧干预组:同模型组腹腔注射PCPA建立失眠模型之后,第三天用地西泮(0.92mg/kg)水溶液灌胃,每日上午8:30~9:00一次,连续5天。其中地西泮片用蒸馏水溶解,按1ml/100g配制成水溶液。2.动物行为学观察及体重监测:每日定时观察大鼠行为学表现,每3小时录制大鼠活动视频半小时,通过自身及组间比较大鼠行为学改变。分别于入组时、第一次腹腔注射PCPA前、第一次灌胃前及处死大鼠取材前当天上午8:00~8:20测量所有大鼠体重并记录。3.将各组受试动物于开始灌胃治疗后第6天快速断头处死,取大鼠脑干组织,超低温保存。4.用RT-PCR法和Western-Blot法分别检测大鼠脑干PBR mRNA和蛋白的表达。结果1.大鼠行为学变化:对照组大鼠无明显变化。模型组和干预组大鼠于第一次腹腔注射PCPA混悬液28-30h后,昼伏夜出的节律消失、睡眠时间缩短等失眠表现,模型成功率94.4%。干预组大鼠于地西泮灌胃后失眠症状较模型组逐渐恢复。2.体重改变:入组时、第一次腹腔注射PCPA前三组大鼠体重相当;第一次灌胃前模型组和干预组体重相当,但较对照组均减轻(p<0.01,q=5.403;p<0.01,q=5.508);处死大鼠取材前模型组与干预组较对照组均减轻(p<0.01,q=12.214;p<0.01,q=8.045),干预组较模型组增加(p<0.05,q=4.166)。3.与对照组和干预组相比,模型组大鼠脑干PBR mRNA表达上调(p<0.05);干预组和对照组PBR mRNA表达无差异(p=0.776)。4.与对照组和干预组相比,模型组大鼠脑干PBR蛋白表达上调(p<0.05);干预组和对照组PBR蛋白表达无差异(p=0.461)。结论1.腹腔注射PCPA可以成功复制大鼠失眠模型,该法操作简便,安全性高,大鼠失眠过程清晰。2.脑干PBR表达上调可能参与了PCPA致大鼠急性失眠的病理生理过程。
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全文目录
摘要 5-7 ABSTRACT 7-12 主要缩略词表 12-14 第一章 前言 14-16 第二章 实验材料 16-18 2.1 主要试剂 16 2.2 主要仪器与设备 16-18 第三章 实验方法 18-25 3.1 研究对象 18 3.2 动物分组及失眠模型的建立 18 3.3 PCPA失眠大鼠模型的评估 18-19 3.4 组织取材 19 3.5 RT-PCR检测脑干PBR mRNA表达 19-22 3.5.1 引物设计与合成 19 3.5.2 RNA样品纯度及浓度检测 19-20 3.5.3 脑干组织总RNA的提取 20 3.5.4 RNA逆转录合成cDNA 20-21 3.5.5 PCR扩增 21-22 3.5.6 PCR产物电泳检测 22 3.5.7 图像及数据处理 22 3.6 Western-Blot检测PBR蛋白表达 22-24 3.6.1 脑干总蛋白的提取 22 3.6.2 BCA法测定蛋白浓度 22-23 3.6.3 Western-Blot操作步骤 23-24 3.6.4 图像及数据处理 24 3.7 统计学分析 24-25 第四章 结果 25-29 4.1 大鼠行为学改变 25 4.2 大鼠体重改变 25-26 4.3 总RNA完整性检测 26-27 4.4 各组PBR mRNA表达及比较 27-28 4.5 各组PBR蛋白表达及比较 28-29 第五章 讨论 29-39 5.1 睡眠的神经机制 29-30 5.2 失眠动物模型的复制与评价 30-31 5.2.1 啮齿类动物与人类睡眠的异同 30 5.2.2 PCPA致失眠的机制 30-31 5.3 PBR的命名、结构特点、分布及功能 31-34 5.4 PBR与睡眠障碍 34-39 5.4.1 PBR与伴睡眠障碍的神经变性疾病 34-35 5.4.2 PBR与伴睡眠障碍的精神疾病 35-37 5.4.3 PBR与PCPA致急性失眠 37-39 第六章 结论 39-40 参考文献 40-45 综述 45-70 参考文献 61-70 致谢 70-71 攻读硕士学位期间参加的主要学术会议 71 攻读硕士学位期间参加的科研项目 71
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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学
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