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PBR在PCPA致失眠大鼠脑干中的表达

作 者: 杨德
导 师: 杨晓苏
学 校: 中南大学
专 业: 神经病学
关键词: 失眠 PCPA PBR 脑干
分类号: R740
类 型: 硕士论文
年 份: 2011年
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内容摘要


目的本研究拟采用腹腔注射对氯苯丙氨酸(p-chlorophenylalanine, PCPA)制作失眠大鼠模型,同步设立生理盐水对照组和地西泮干预组,通过行为学、体重的观察及检测大鼠脑干组织中PBR mRNA和蛋白的表达变化,初步探讨其与失眠的关系。方法1.动物分组及处理:采用36只清洁级健康雄性SD大鼠为实验对象,鼠龄8-10周,体重180-220g。随机分为模型组、对照组和干预组,每组12只。①模型组:每日上午8:30~9:00腹腔注射PCPA(300mg/kg)制作失眠大鼠模型,连续2天。其中PCPA用生理盐水(pH:7-8)溶解,按1ml/100g配制成混悬液。第三天以蒸馏水按0.1ml/Kg灌胃,连续5天;②对照组:每日上午8:30~9:00以生理盐水按0.1ml/Kg进行腹腔注射,连续2天,第三天以蒸馏水按0.1ml/Kg灌胃,连续5天;⑧干预组:同模型组腹腔注射PCPA建立失眠模型之后,第三天用地西泮(0.92mg/kg)水溶液灌胃,每日上午8:30~9:00一次,连续5天。其中地西泮片用蒸馏水溶解,按1ml/100g配制成水溶液。2.动物行为学观察及体重监测:每日定时观察大鼠行为学表现,每3小时录制大鼠活动视频半小时,通过自身及组间比较大鼠行为学改变。分别于入组时、第一次腹腔注射PCPA前、第一次灌胃前及处死大鼠取材前当天上午8:00~8:20测量所有大鼠体重并记录。3.将各组受试动物于开始灌胃治疗后第6天快速断头处死,取大鼠脑干组织,超低温保存。4.用RT-PCR法和Western-Blot法分别检测大鼠脑干PBR mRNA和蛋白的表达。结果1.大鼠行为学变化:对照组大鼠无明显变化。模型组和干预组大鼠于第一次腹腔注射PCPA混悬液28-30h后,昼伏夜出的节律消失、睡眠时间缩短等失眠表现,模型成功率94.4%。干预组大鼠于地西泮灌胃后失眠症状较模型组逐渐恢复。2.体重改变:入组时、第一次腹腔注射PCPA前三组大鼠体重相当;第一次灌胃前模型组和干预组体重相当,但较对照组均减轻(p<0.01,q=5.403;p<0.01,q=5.508);处死大鼠取材前模型组与干预组较对照组均减轻(p<0.01,q=12.214;p<0.01,q=8.045),干预组较模型组增加(p<0.05,q=4.166)。3.与对照组和干预组相比,模型组大鼠脑干PBR mRNA表达上调(p<0.05);干预组和对照组PBR mRNA表达无差异(p=0.776)。4.与对照组和干预组相比,模型组大鼠脑干PBR蛋白表达上调(p<0.05);干预组和对照组PBR蛋白表达无差异(p=0.461)。结论1.腹腔注射PCPA可以成功复制大鼠失眠模型,该法操作简便,安全性高,大鼠失眠过程清晰。2.脑干PBR表达上调可能参与了PCPA致大鼠急性失眠的病理生理过程。

全文目录


摘要  5-7
ABSTRACT  7-12
主要缩略词表  12-14
第一章 前言  14-16
第二章 实验材料  16-18
  2.1 主要试剂  16
  2.2 主要仪器与设备  16-18
第三章 实验方法  18-25
  3.1 研究对象  18
  3.2 动物分组及失眠模型的建立  18
  3.3 PCPA失眠大鼠模型的评估  18-19
  3.4 组织取材  19
  3.5 RT-PCR检测脑干PBR mRNA表达  19-22
    3.5.1 引物设计与合成  19
    3.5.2 RNA样品纯度及浓度检测  19-20
    3.5.3 脑干组织总RNA的提取  20
    3.5.4 RNA逆转录合成cDNA  20-21
    3.5.5 PCR扩增  21-22
    3.5.6 PCR产物电泳检测  22
    3.5.7 图像及数据处理  22
  3.6 Western-Blot检测PBR蛋白表达  22-24
    3.6.1 脑干总蛋白的提取  22
    3.6.2 BCA法测定蛋白浓度  22-23
    3.6.3 Western-Blot操作步骤  23-24
    3.6.4 图像及数据处理  24
  3.7 统计学分析  24-25
第四章 结果  25-29
  4.1 大鼠行为学改变  25
  4.2 大鼠体重改变  25-26
  4.3 总RNA完整性检测  26-27
  4.4 各组PBR mRNA表达及比较  27-28
  4.5 各组PBR蛋白表达及比较  28-29
第五章 讨论  29-39
  5.1 睡眠的神经机制  29-30
  5.2 失眠动物模型的复制与评价  30-31
    5.2.1 啮齿类动物与人类睡眠的异同  30
    5.2.2 PCPA致失眠的机制  30-31
  5.3 PBR的命名、结构特点、分布及功能  31-34
  5.4 PBR与睡眠障碍  34-39
    5.4.1 PBR与伴睡眠障碍的神经变性疾病  34-35
    5.4.2 PBR与伴睡眠障碍的精神疾病  35-37
    5.4.3 PBR与PCPA致急性失眠  37-39
第六章 结论  39-40
参考文献  40-45
综述  45-70
  参考文献  61-70
致谢  70-71
攻读硕士学位期间参加的主要学术会议  71
攻读硕士学位期间参加的科研项目  71

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中图分类: > 医药、卫生 > 神经病学与精神病学
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