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UGBP在NIH3T3和HBE细胞上的变化及机制的初步探讨

作　者: 曹生田
导　师: 罗自强
学　校: 中南大学
专　业: 生理学
关键词: 肺纤维化 BLM TGF-β1 UGBP SIS3
分类号: R563
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


子宫珠蛋白(uteroglobin, UG)是由Clara细胞分泌的一种高保守,多功能的小分子分泌蛋白,它的生物学效应可能有赖于子宫珠蛋白结合蛋白(Uteroglobin-binding protein, UGBP)的介导。但目前,国内外对UGBP的研究了解甚少,远远滞后于对其天然配体UG的研究。本实验首先在整体水平上观察小鼠肺纤维化时UGBP的变化,在此基础上进一步在细胞水平上观察TGF-β1对NIH3T3和HBE细胞UGBP表达的影响,并初步探讨其胞内信号转导机制,为进一步探讨肺纤维化过程中肺内UGBP变化的机制研究提供新的线索。方法：①采用气管注射博莱霉素复制小鼠肺纤维化模型,用HE、Massson染色以及real-timePCR检测TGF-β1和Ⅲ型胶原mRNA的变化来验证纤维化模型的成功性,再用real-timePCR和组织芯片免疫组化检测UGBP的变化。①real-timePCR检测NIH3T3和HBE细胞上UGBP mRNA的表达；③采用smad3蛋白抑制剂(SIS3)预处理,real-timePCR法检测N1H3T3和HBE上UGBP mRNA的表达结果：1.HE染色显示：注射博莱霉素21天可见成纤维细胞明显增加,并形成纤维化病灶。Massson染色显示：注射博莱霉素第7天,胶原合成开始增加,到14、21天胶原已大量合成沉积。Real-timePCR检测TGF-β1和Ⅲ型胶原mRNA的结果显示：TGF-β1mRNA的表达在注射博莱霉素第7,14,21天升高(p<0.05)；Ⅲ型胶原mRNA在第7天升高,第14,21天升高明显(p<0.05)。2.整体水平上,real-timePCR结果显示：UGBP mRNA在第7天表达上调(p<0.05)；到第14天,有上调趋势；第21天,与第7,14天比较已有下调趋势,与对照组比较基本无变化。组织芯片免疫组化结果显示：UGBP蛋白在支气管上皮细胞,炎症细胞和肺泡上皮细胞表达阳性强,纤维灶成纤维细胞选择性高表达；气道上皮细胞比肺泡上皮细胞,间质成纤维细胞UGBP蛋白的表达阳性要强。3. BLM (1μg/ml)作用NIH3T3细胞8h、12h, real-timePCR结果显示：BLM能下调其UGBP mRNA的表达(8h组与对照组比较,p<0.05；12h组与对照组比较,p<0.01)4.TGF-β1(10ng/ml)作用NIH3T3细胞8h、12h, real-timePCR结果显示：TGF-β1能下调其UGBP mRNA的表达,(8h组与对照组比较,p<0.05；12h组与对照组比较,p<0.01)；有血清空白组和无血清空白组比较,有血清组UGBPmRNA表达明显下调(p<0.01)。5.TGF-β1(10ng/ml)作用于HBE细胞12h, real-timePCR结果显示：TGF-β1能上调其UGBP mRNA的表达(p<0.01)6.SIS3预处理可以减轻TGF-β1对NIH3T3细胞UGBP mRNA表达下调的效应,SIS3+TGF-β1组与TGF-β1组比较有统计学意义(P<0.01);SIS3预处理可以减轻TGF-β1对HBE细胞UGBP mRNA表达上调的效应,SIS3+TGF-β1组与TGF-β1组比较有统计学意义(P<0.05)结论：1.在肺纤维化过程中,UGBP mRNA的表达呈现—过性上调。2.TGF-β1在离体培养条件下对NIH3T3和HBE细胞UGBPmRNA的表达具有不同的影响,可抑制NIH3T3细胞和促进HBE细胞UGBPmRNA的表达。3.TGF-β1调节NIH3T3和HBE细胞UGBP mRNA表达的作用有赖于smad信号通道的介导。

全文目录


摘要  5-8
ABSTRACT  8-13
英文缩写注解  13-14
前言  14-16
第一章 材料与方法  16-26
  1.实验材料  16-18
  2 方法  18-25
  3.统计学分析  25-26
第二章 结果  26-42
  1 肺纤维化小鼠UGBP mRNA表达的变化  26-27
  2 real-time PCR观察NIH3T3和HBE UGBP基因的表达  27-28
  3 Smad蛋白对NIH3T3和HBE UGBP表达的影响  28-30
  4 附图  30-42
第三章 讨论与结论  42-47
  1 讨论  42-46
  2 结论  46-47
参考文献  47-53
综述  53-69
  参考文献  63-69
致谢  69

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 呼吸系及胸部疾病 > 肺疾病
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