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甲氨蝶呤、辛伐他汀对类风湿关节炎外周血单个核细胞Th17/IL-17的作用及机制研究

作　者: 厉彦山
导　师: 姜林娣
学　校: 复旦大学
专　业: 内科学
关键词: IL-17 甲氨蝶呤 关节炎，类风湿 单个核细胞 辛伐他汀 BATF
分类号: R593.22
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


第一部分：不同浓度甲氨蝶呤对类风关及健康人外周血单个核细胞Th17/IL-17产生的影响背景：类风湿关节炎(类风关)是一系统性、炎症性自身免疫病,反复发作的滑膜炎可造成关节破坏,功能渐进性障碍,严重者致残。甲氨蝶呤(Methotrexate,MTX)是目前临床中广泛应用和首选的改变病情抗风湿药物(disease-modifying anti-rheumatic drugs, DMARDs),其作用机制仍不清楚。Th17细胞作为重要的免疫调节细胞,其分泌的IL-17是参与类风关炎症反应的重要炎症因子。MTX作为有效的类风关治疗药物,它的抗炎作用与Th17/IL-17关系尚不明确。目的：体外观察不同浓度的MTX对外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)Th17细胞分化和IL-17合成的影响,探究MTX有效治疗类风关的可能机制。方法：分离类风关患者和健康人PBMCs,予不同浓度MTX预处理,抗人CD3和抗人CD28单抗刺激后,37℃5%CO2培养箱培养。分别于培养的不同阶段收集细胞或上清液,采用逆转录RT-PCR技术分析IL-17mRNA的表达水平；ELISA法检测细胞培养液中IL-17的浓度；荧光抗体标记细胞表面抗原CD4和胞内蛋白IL-17,流式细胞仪分析CD4+IL-17+细胞的比例。结果：类风关和健康人PBMCs经抗人CD3和抗人CD28单抗激活后,IL-17mRNA表达水平(RA：0.78±0.14 vs.0.54±0.15,p=0.02：HC：0.71±0.17 vs.0.34±0.14,p<0.01)和IL-17蛋白分泌水平(RA：436.16±205.08 vs.15.36±6.57,p〈0.01：HC：271.83±145.11 vs.11.48±7.12,p<0.01)明显升高,而不同浓度MTX组不同程度地减弱了IL-17mRNA和IL-17分泌蛋白水平,5.0和25.0μg/mlMTX显著抑制IL-17mRNA和IL-17蛋白产生(p〈0.05)。与健康人PBMCs相比较,类风关PBMCs产生更高水平的IL-17,同时MTX更明显地抑制类风关PBMCs表达和分泌IL-17。MTX剂量对数值(lgMTX)与IL-17mRNA表达水平成负相关关系(RA：R2=0.96,p=0.02；HC：R2=0.94,p=0.03),这种效应关系未表现在IL-17蛋白分泌水平。MTX没有明显降低PBMCs中CD4+IL-17+T细胞的比例。结论：MTX抑制类风关及健康人PBMCs合成与分泌工L-17,这种作用在类风关PBMCs更明显,抑制IL-17产生可能是MTX有效治疗类风关的机制之一。第二部分：辛伐他汀对类风关及健康人单个核细胞合成工L-17及Thl7转录因子BATF的影响背景：类风关作为一种慢性炎症性疾病,在破坏关节滑膜导致关节功能丧失的同时也增加了心血管疾病患病风险。他汀类降脂药物是心血管重要治疗药物之一,近年来被发现具有免疫调节作用并在类风关治疗中有明显的抗炎作用。IL-17是参与类风关炎症反应的重要炎症因子,B细胞活化转录因子(B-cell activating transcription factor, BATF)是调控IL-17基因转录的重要转录因子,其属于激活蛋白-1(activator protein-1, AP-1)家族。他汀类药物可通过AP-1途径影响相关炎症因子的产生,是否会通过作用于BATF而抑制IL-17合成而发挥在类风关中的治疗作用尚不明确。目的：研究辛伐他汀对类风关PBMCs合成IL-17的作用及对B细胞活化转录因子BATF的影响。方法：健康人和类风关PBMCs在有或无辛伐他汀或甲羟戊酸条件下,予PMA和离子霉素刺激培养。RT-PCR技术分析IL-17、BATF和NFAT2的mRNA表达水平,以3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)为内参；ELISA法检测各组细胞培养液中IL-17浓度；Western Blot分析BATF蛋白在辛伐他汀作用后表达变化。结果：类风关PBMCs在20μM辛伐他汀作用后,PMA和离子霉素所诱导的IL-17mRNA水平被抑制(0.60±0.18 vs.0.3l±0.17,p=0.04),IL-17蛋白分泌水平也减弱(79.64±12.67 vs.44.61±3.90,p9-0.01)。类风关PBMCs由BATF mRNA水平明显高于健康人(0.39±0.05 vs.0.25±0.07,p=0.04),但辛伐他汀作用后BATFmRNA表达水平变化不明显,BATF蛋白水平也无明显变化。甲羟戊酸与辛伐他汀共加入PBMCs后,辛伐他汀抑制IL-17产生的作用明显降低。结论：辛伐他汀能够抑制活化的PBMCs合成和分泌IL-17,这种作用不是通过抑制转录因子BATF的表达而产生,尽管BATF在类风关PBMCs中高表达。

全文目录


中文摘要  5-7
ABSTRACT  7-9
英文缩写索引  9-11
前言  11-14
第一部分:不同浓度甲氨蝶呤对类风关及健康人外周血单个核细胞Th17/IL-17产生的影响  14-30
  背景  14-15
  材料和方法  15-20
  实验结果  20-27
  讨论  27-29
  结论  29-30
第二部分:辛伐他汀对类风关及健康人单个核细胞合成IL-17及Th17转录因子BATF的影响  30-49
  背景  30-34
  材料和方法  34-39
  实验结果  39-46
  讨论  46-48
  结论  48-49
全文总结  49-50
参考文献  50-55
综述  55-66
  参考文献  63-66
发表论文情况  66-67
致谢  67-68

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 全身性疾病 > 免疫性疾病 > 自身免疫性疾病、结缔组织疾病 > 类风湿性关节炎
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