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稳定转染HBV X基因对人胆管癌细胞系RBE生物学行为的影响

作　者: 吕涛
导　师: 刘厚宝
学　校: 复旦大学
专　业: 外科学
关键词: 乙肝病毒X蛋白 胆管癌 慢病毒载体 细胞增殖
分类号: R512.62
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus, HBV)属于嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae),感染人体后可以引起急性或暴发性肝炎、慢性肝炎,并与肝硬化(Liver Cirrhosis)以及肝细胞肝癌(Hepatocellular Carcinoma, HCC)等一系列肝脏疾病的发生发展密切相关。据估计,全球有乙肝病毒表面抗原(HBsAg)携带者3.5亿人,其中三分之一在中国,全世界每年有75万人死于HBV感染引起的疾病,其中28万人来自中国,乙肝病毒感染是一个非常严重的公共卫生问题。HBV基因组中的X基因(HBx)及其表达产物X蛋白(HBxAg)在HBV感染相关的肝细胞癌发生发展中可能起关键作用。HBxAg自身并没有结合DNA的能力,但可与多种宿主蛋白相互作用并影响其功能,进而产生多种不同的生物学效应。细胞凋亡是为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序死亡,涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用。目前研究发现,多种肿瘤的发生并非由细胞无限增值所引起,细胞凋亡途径受阻或凋亡功能丧失已成为一些肿瘤发生的重要诱因。国内外学者此前的研究表明,HBxAg在某些实验体系中可通过抑制p53、抑制Fas信号通路,抑制caspase-3的活性等途径抑制细胞凋亡,但同时也有实验表明,HBxAg能够诱导细胞凋亡,具体机制目前仍不清楚。近年研究发现,乙肝病毒感染可能与胆管细胞癌(Cholangiocarcinoma)的发生发展相关,是胆管癌发生的危险因子之一。例如,虽然目前尚无确切证据显示HBV可有效感染胆管细胞或在其中完成病毒生活史周期,但在某些胆管癌病例癌组织切片中可以检测到HBxAg,且其阳性率高于HBsAg,与肝癌的研究中的发现相吻合。有研究报道,HBx瞬时转染胆管癌细胞后促进癌细胞增殖,但也有实验观察到HBx转染胆管癌细胞后促进细胞凋亡为研究乙肝病毒与胆管癌发生之间可能存在的联系,本研究分别构建了表达HBsAg、HBc/eAg和HBxAg的重组慢病毒,感染RBE胆管癌细胞后实现了相应HBV蛋白的高效率表达。进一步利用流式细胞分选技术,从上述感染细胞出发,建立了稳定表达HBsAg、HBc/eAg的RBE细胞系。本研究还对重组慢病毒介导的HBxAg表达对RBE细胞生物学特性的影响进行了初步的分析。细胞生长曲线和克隆生长试验的结果显示,HBxAg的表达对RBE细胞的生长增殖有不利影响；而在凋亡分析试验中,未发现HBxAg的表达对RBE细胞有明显的凋亡促进效应。通过上述工作,一方面为研究HBV蛋白对胆管细胞的效应提供了一套高效、有力的方法和工具,另一方面通过初步揭示HBxAg对RBE细胞生物学行为特性的影响,为进一步深入研究HBxAg在胆管肿瘤发生中可能起到的作用提供了线索和思路。

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中图分类: > 医药、卫生 > 内科学 > 传染病 > 病毒传染病 > 病毒性肝炎 > 乙型肝炎
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