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大叶藻提取活性物质对仿刺参“腐皮综合症”病灶优势菌及白脊藤壶幼体附着抑制研究

作　者: 刘阳
导　师: 姜国良
学　校: 中国海洋大学
专　业: 遗传学
关键词: 大叶藻仿刺参“腐皮综合症”病灶优势菌白脊藤壶金星幼体
分类号: S947.9
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

本文主要研究了大叶藻(Zotera marina L.)提取物对仿刺参(Apostichopus japonicus)“腐皮综合症”致病菌(C6)及病灶优势菌(TB、BP4、4)的抑菌活性及白脊藤壶(Balanus albicostatus Pilsbry)金星幼体附着的抑制作用。大叶藻采自青岛海域,将大叶藻洗净、阴干、粉碎、过40目筛绢得大叶藻粉末,用150ml 95%的乙醇提取大叶藻粉末得粗提物,粗提物经乙酸乙酯及去离子水萃取得提取液A水相及提取液A乙酸乙酯相,配制0.1g/mL溶液用于继续研究。提取液A水相及乙酸乙酯相对仿刺参“腐皮综合症”致病菌(C6)及病灶优势菌(TB、BP4、4)进行抑菌活性研究,经双碟法抑菌,抑菌实验结果表明提取液A水相具有抑菌活性,抑菌圈直径分别为13.53cm(C6)、12.13cm(TB)、13.62cm(BP4)、9.22cm(4)。而提取液A乙酸乙酯相没有抑菌活性。实验选取金黄色葡萄球菌与受试菌对照,同时选取甲氧苄啶(TMP)和磺胺异恶唑(SIZ)为提取相阳性对照。大叶藻提取液A水相的最低抑菌浓度(MIC)为12.8g/ml。经薄层层析(TLC)纯化分析,提取液A水相得到六条条带。比较提取液A水相与提取液A水相活性组分之间的抑菌结果表明,菌4对提取液A水相各组分的抑菌活性是仿刺参四种受试菌中最敏感,而对提取液A水相最不敏感,证实活性组分之间互相拮抗,所以单一活性组分的抑菌活性比大叶藻提取液A水相的抑菌活性强。本文继续研究了大叶藻的提取液A水相对白脊藤壶幼体的附着抑制效果。实验藤壶为常见白脊藤壶(Balanus albicostatus Pilsbry)金星幼体。冯丹青建立的白脊藤壶金星幼体附着抑制实验中最佳实验条件为:温度,30℃;盐度,35;幼体密度,5只/ml;附着基,聚苯乙烯。研究通过建立的白脊藤壶金星幼体的实验模型研究大叶藻提取液A水相对白脊藤壶金星幼体的抑制结果,实验设立了大叶藻提取液A水相四个浓度梯度:10、50、100、500和1000mg/L.。24小时培养实验结果表明10mg/L体系白脊藤壶金星幼体的附着率为56.78%;50mg/L体系白脊藤壶金星幼体的附着率为47.23%;100mg/L体系白脊藤壶金星幼体的附着率为20.18%;500mg/L体系白脊藤壶金星幼体的附着率为4.32%;1000mg/L体系东方小藤壶金星幼体的附着率为0%,白脊藤壶金星幼体的附着率为0%。大叶藻活性物质的提取结果证实大叶藻提取物具有广泛的活性,同时大叶藻分布广泛,因此大叶藻的提取物具有巨大的应用潜力。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-13
第一章文献综述  13-35
  1 海洋活性物质的研究进展  13-19
    1.1 海洋活性物质提取现状  13-15
    1.2 海洋活性物质的提取方法  15-18
      1.2.1 传统提取方法  15-16
      1.2.2 现代提取技术  16-18
    1.3 海洋活性物质的发展前景和研究展望  18-19
  2 仿刺参病害及大叶藻在仿刺参养殖中的作用  19-26
    2.1 仿刺参简介  19-20
    2.2 仿刺参病害研究  20-24
      2.2.1 寄生虫病  20-21
      2.2.2 细菌病  21-23
      2.2.3 霉菌病  23
      2.2.4 病毒病  23
      2.2.5 敌害生物  23-24
    2.3 仿刺参养殖业的发展  24
    2.4 仿刺参养殖业对生态环境的影响  24
    2.5 仿刺参养殖的综合防治措施  24-25
    2.6 大叶藻在仿刺参养殖中的作用研究  25-26
  3 藤壶及藤壶附着研究  26-34
    3.1 藤壶的形态结构  27-28
    3.2 藤壶的生殖与发育  28
    3.3 藤壶的危害  28-30
      3.3.1 藤壶附着的危害  28-29
      3.3.2 藤壶的粘附机理及影响因素  29-30
    3.4 藤壶附着抑制研究进展  30-32
    3.5 海洋天然产物抑制藤壶附着研究进展  32-34
      3.5.1 海洋植物活性物质对藤壶的附着抑制  32
      3.5.2 海洋动物活性物质对藤壶的附着抑制  32-33
      3.5.3 海洋微生物活性物质对藤壶的附着抑制  33-34
  4 研究目的及意义  34-35
第二章大叶藻提取活性物质对仿刺参“腐皮综合症”病灶优势菌的抑制作用研究  35-47
  1 材料与方法  35-40
    1.1 实验材料  35-37
      1.1.1 提取海藻  35
      1.1.2 实验菌种  35
      1.1.3 实验仪器  35-36
      1.1.4 实验试剂及主要试剂配方  36-37
    1.2 实验方法  37-40
      1.2.1 大叶藻样品处理  37
      1.2.2 大叶藻活性物质提取  37-38
      1.2.3 提取液抑菌研究  38-39
      1.2.4 提取液的薄层层析(Thin layer chromatography，TLC)纯化分析  39
      1.2.5 大叶藻提取液A水相高效液相色谱(HPLC)分析  39-40
  2 实验结果  40-43
    2.1 提取液双碟法抑菌实验结果  40-41
      2.1.1 95%乙醇提取液抑菌实验结果  40-41
      2.1.2 甲醇甲苯提取液抑菌实验结果  41
    2.2 提取活性物质对仿刺参“腐皮综合症”病灶优势菌最低抑菌浓度(MIC)结果  41-42
    2.3 提取液薄层层析(TLC)纯化分析结果  42-43
      2.3.1 TLC各条带Rf值  42
      2.3.2 不同组分的抑菌实验结果  42-43
    2.4 提取液A水相高效液相色谱(HPLC)分析结果  43
  3 讨论  43-46
    3.1 乙醇提取液抑菌结果分析  43
    3.2 不同提取方法提取结果的差异  43-44
    3.3 不同时节大叶藻提取活性物质抑菌活性研究  44-45
    3.4 TLC 各条带实验结果分析  45
    3.5 HPLC结果分析  45-46
  4 小结  46-47
第三章大叶藻提取活性物质对白脊藤壶(Balanus albicostatus Pilsbry)附着抑制作用研究  47-54
  1 材料与方法  48-50
    1.1 实验材料  48-49
      1.1.1 实验藻种  48
      1.1.2 实验生物  48
      1.1.3 实验仪器及器皿  48
      1.1.4 实验试剂及主要试剂配方  48-49
    1.2 实验方法  49-50
      1.2.1 藤壶幼虫的培养  49
      1.2.2 大叶藻提取物对白脊藤壶抑制影响  49-50
  2 实验结果  50-51
    2.1 大叶藻提取物对白脊藤壶金星幼体的附着抑制结果  50-51
  3 讨论  51-53
    3.1 大叶藻提取活性物质对白脊藤壶金星幼体抑制结果研究  51-52
    3.2 大叶藻提取物对白脊藤壶金星幼体抑制机理探讨  52-53
    3.3 大叶藻提取物对仿刺参“腐皮综合症”病灶优势菌及白脊藤壶金星幼体抑制研究  53
  4 小结  53-54
参考文献  54-62
致谢  62-63
攻读硕士期间发表学术论文  63

大叶藻提取活性物质对仿刺参“腐皮综合症”病灶优势菌及白脊藤壶幼体附着抑制研究

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