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恶性血液病患者侵袭性曲霉菌感染的早期抗原和分子生物学诊断研究

作　者: 徐明珠
导　师: 孙爱宁
学　校: 苏州大学
专　业: 血液病学
关键词: 曲霉病血液病半乳甘露聚糖 1,3-β-D葡聚糖 real-time PCR 诊断
分类号: R733
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 49次
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内容摘要

目的:(1)评价曲霉菌半乳甘露聚糖抗原(GM)、1,3-β-D葡聚糖抗原(BG)及Real-Time PCR检测方法对恶性血液病患者侵袭性曲霉菌感染(IA)的诊断价值以及这些方法在监测抗真菌治疗效果中的作用。方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附分析(ELISA)法、比色测定法以及Real-Time PCR三种方法检测197例白血病和行造血干细胞移植患者的613份血清标本的GM、BG浓度以及曲霉菌DNA拷贝数,其中GM试验阳性定义为连续两次不同时点检测A值>0.5或单次>0.8,BG试验阳性定义为>80pg/ml ,Real-Time PCR以标本两孔Ct均值≤30定义为阳性。并根据我国制定的血液病/恶性肿瘤患者侵袭性真菌感染(IFI)的诊断标准与治疗原则为标准,将研究对象分为:确诊、临床诊断、拟诊及非真菌感染四个类别,分别研究和对比三种诊断试验的评价指标。结果:共收集197例白血病和进行造血干细胞移植患者的613份血清标本。其中包括确诊IFI3例其中确诊IA 1例,临床诊断IFI66例其中确诊IA 52例,拟诊IFI52例,排除IFI76例。(1)按照试验中界定的界值,GM试验的敏感度为81.1%,特异度为88.2%,,阳性预测值为90.2%,阴性预测值为86.5%,在全部分组中BG试验的的敏感度为89.9%,特异度为85.5%,阳性预测值为84.9%,阴性预测值为90.2%,两试验的假阳性率分别为12.8%,14.5%,差异无统计学意义(P>0.05),两者假阳性患者的分布差异有统计学意义(P<0.05)。联合两种检测方法则可明显改善试验的特异度(98%)及阳性预测值(98%),而对试验的特异度及阴性预测值无影响。(2)Real-Time PCR以标本两孔Ct均值≤30定义为阳性,其敏感性为90.6%,特异性为80.3%,阳性预测值为76.2%,阴性预测值为92.4%,诊断符合率84.5%。(3)三种检测方法联合的诊断评价,以确诊及临床诊断IA患者为真阳性组,以排除IFI患者为阴性组。显示三者联合的敏感度为100%,特异度为78.5%,阳性预测值为75.1%,阴性预测值为100%,三者联合,诊断的敏感度明显提高,特异度仅轻度下降。(4)本研究中的前瞻性研究发现,三种检测方法阳性结果出现均比临床痰培养及典型影像学表现要早(表3.6),Real-time PCR结果提示阳性较GM,BG抗原检测要提前,但t检验P=0.824,P=0.641,差异均无统计学意义。(5)38例完成针对曲霉菌感染抢先治疗的患者,按疗效分为有效组及无效组,分别于静脉抗真菌药物使用前-3、0、3、7、11、15d ,6个时点检测GM,BG,Ct均值,结果如下:a.治疗有效组GM值呈下降趋势并降至正常,治疗无效组GM值反而上升。对无效组与有效组在不同检测时点GM值总体分布位置进行Wilcoxon秩和检验。有效组与无效组在治疗前GM值分布无差异(P=0.864),在治疗7 d后其检测值分布差异有统计学意义(P<0.05)。b. BG抗原在治疗过程中的变化趋势与GM在治疗过程中的变化趋势类似。c.Real-time PCR:在临床及微生物学依据出现之前,Ct值的均值有下降趋势,进行抗曲霉抢先治疗后,治疗有效组其Ct值迅速上升,治疗无效组其Ct值起始亦有上升趋势,后Ct值又有下降趋势,治疗前有效组与无效组Ct值差异无统计学意义(P>0.05),治疗后在各检测时点其Ct值差异亦无统计学意义(P>0.05)。因此,动态检测GM,BG抗原对抗真菌疗效的评价有着一定的意义,而动态监测Ct值对评价疗效无显著性意义。结论:血清BG,GM抗原检测以及实时荧光定量PCR可以为早期诊断IA提供有力证据,联合BG,GM抗原两种检测方法有利于判断假阳性试验结果,动态检测GM、BG抗原水平,有利于判断疗效及预后;Real-Time PCR,以标本两孔Ct均值≤30定义为阳性,可以获得较高的敏感度及特异度,动态监测Ct值对评价疗效无显著性意义。

全文目录

中文摘要  4-6
Abstract  6-9
引言  9-14
第一部分血清GM 检测对血液病患者侵袭性曲霉菌感染的诊断及评价疗效的价值  14-29
  材料与方法  14-18
  结果  18-25
  讨论  25-27
  参考文献  27-29
第二部分 1，3-β-D 葡聚糖检测诊断血液病患者侵袭性曲霉病的临床价值  29-41
  前言  29
  材料与方法  29-31
  结果  31-36
  讨论  36-39
  参考文献  39-41
第三部分实时荧光定量PCR 检测诊断血液病患者侵袭性曲霉病的临床价值  41-53
  前言  41
  材料与方法  41-45
  结果  45-49
  讨论  49-51
  参考文献  51-53
结论  53-54
综述  54-62
硕士在读期间完成及发表的文章  62-63
英文缩略词表  63-64
致谢  64-65

恶性血液病患者侵袭性曲霉菌感染的早期抗原和分子生物学诊断研究

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