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急性髓系白血病的染色体和FISH研究

作　者: 白淑潇
导　师: 薛永权
学　校: 苏州大学
专　业: 血液病学
关键词: 白血病,髓细胞性,急性常规细胞遗传学分析荧光原位杂交隐匿异常复杂核型预后
分类号: R733.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

急性髓系白血病(acute myeoid leukemia, AML)是起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病。染色体核型异常不但对于AML的诊断分型,而且对于其预后的判断和制定合适的治疗方案均有重要意义,目前,采用常规细胞遗传学技术(conventional cytogenetics, CC)成人AML的核型异常检出率约为54%-78%,仍有45%左右的AML显示正常核型。这些具有正常核型的AML对治疗的反应和生存期依然具有很大的异质性。此外AML中10%-12%的复杂染色体核型单靠CC尚不能阐明其异常的性质,近年来,许多学者应用新的分子遗传学和分子生物学技术,揭示了CC未检出的隐匿异常,阐明了复杂异常的性质。本文对330例连续AML作了细胞遗传学和分子细胞遗传学的研究,其中320例染色体检查获得成功,包括317例原发性AML和3例继发性AML。目的分析我国317例原发性急性髓系白血病的细胞遗传学特点;应用间期FISH技术检测隐匿的特异性染色体重排;评价新的分子遗传学技术M-FISH对阐明复杂核型异常性质的价值。方法所有患者均采用骨髓细胞直接法和/或短期培养法制备染色体,采用R显带技术进行核型分析。应用MLL、CBFβ/MYH11、AML1/ETO、PML/RARα一系列FISH探针分别对FAB亚型为M5、M4、M2、M3而CC分析未发现典型的相关易位的病例和伴三体22异常的AML进行FISH检测;应用M-FISH、染色体涂染和间期FISH对伴有复杂核型异常的AML进行分析。结果1、CC分析揭示175例有克隆性核型异常,142例为正常核型,异常核型检出率为55%。结构异常中以特异性染色体易位最为多见,共有103例,占异常核型总数的59%。其中t(15;17) 55例,为最多见的易位,均见于M3亚型,其中位白细胞数较低,CD34和HLA-DR抗原低表达或不表达,完全缓解(CR)率最高,和正常核型组相比差异有统计学意义;其次是t(8;21),见于40例,其中80%为M2亚型,占M2亚型总数的32.7%,其中位白细胞数较正常核型组低,除髓系抗原外常表达CD19,其CR率92%高于复杂核型组;inv(16) 3例,分别见于M2、M4EO和M5型,CR率达100%;11q23重排5例,其中4例为t(9;11),均为M5型,另1例为t(11;19),见于M2型;t(9;22)仅2例,分别见于M5和M6亚型。复杂异常22例,主要见于M5和M6型(各5例),其CR率最低,为38%,11例已死亡,中位生存期仅5个月。t(8;21)组、t(15;17)组和正常核型组的生存率均高于复杂异常组,差异有统计学意义。2、应用AML/ETO探针对38例M2-AML进行检测,发现其中4例t(8;21)阳性:包括2例典型信号模式,2例插入易位;应用PML/RARα探针对9例CC未见t(15;17)的M3-AML进行检测,结果其中6例显示阳性:其中2例为典型阳性信号模式,3例为插入易位所致,1例FISH及多重RT-PCR检测未见PML/RARα,应用RARα探针检测显示RARA基因部分缺失;应用CBFβ断裂点分开的双色FISH探针对23例CC分析未见典型inv(16)的M4(包含M4EO)进行检测,结果发现其中3例阳性(均为典型信号);应用MLL探针对38例CC分析未见11q23重排的M5进行检测,结果均为阴性。19例+22AML中FISH检测发现13(68.4%)例为CBFβ重排阳性,包括M4EO7例,M5 3例,M2a 2例,M1 1例;14例的随访资料显示CBFβ重排阳性的11例中10例尚存活,仅1例死亡,而CBFβ重排阴性的3例均已死亡。3、317例原发性AML中CC分析共检出22例复杂核型异常,占异常核型总数的12.5%。其中3例只有数目异常,2例只有结构异常,17例为数目合并结构异常。具体异常类型包括染色体增加19种,最常见的为+8,见于8例次;染色体丢失15种,其中-5、-7和-19最多见,各见于4例次,结构异常86种,包括5种平衡易位,23种来源不明的标记染色体,2种环状染色体,5种衍生染色体,27种染色体部分缺失和24种不明来源的额外物质。M-FISH对其中10例和1例MPD转化而来的AML进行分析除证实CC发现的异常外,还探明6种标记染色体的来源,查明2种衍生染色体的性质,检出8种新的衍生染色体。后者均系不平衡易位所致,其中不少被CC误认为染色体部分缺失、不明来源的额外物质、染色体单体和标记染色体等。染色体涂染证实了多数M-FISH的发现。结论1、本组原发性AML的异常核型检出率为55%,其中特异性染色体易位占59%,仍有45%的病例显示正常核型。2、本研究证实染色体核型有重要的预后价值:t(8;21)和t(15;17) AML预后较好,复杂核型异常AML预后最差。3、应用染色体易位探针进行间期FISH检测确实可在少数伴有正常核型或伴特异性染色体易位的其它异常AML中检出隐匿性重排,例如AML/ETO,PML/RARα和CBFβ/MYH11,但对于检出MLL重排似无帮助。4、三体22有预测inv(16)的作用。5、M-FISH有助于阐明复杂核型异常中标记染色体来源和衍生染色体的不平衡易位性质;6、CC是最基本的检查,FISH则是其重要的补充,二者结合可提供更全面的遗传学信息。

全文目录

中文摘要  3-6
Abstract  6-11
引言  11-13
第一部分 317 例原发性急性髓系白血病的染色体分析  13-32
  患者资料  13-14
  材料与方法  14-16
  结果  16-20
  讨论  20-23
  参考文献  23-26
  附录  26-32
第二部分伴有隐匿性染色体易位AML 的FISH 研究  32-45
  病例资料  32
  材料与方法  32-34
  结果  34-35
  讨论  35-38
  参考文献  38-40
  附录  40-45
第三部分急性髓系白血病复杂核型的研究  45-56
  材料和方法  45-47
  结果  47-49
  讨论  49-51
  参考文献  51-53
  附录  53-56
综述  56-65
研究生期间完成及待发表的论文  65-66
缩略词表  66-67
致谢  67

急性髓系白血病的染色体和FISH研究

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