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腺病毒介导BMP-2及HIF-1α~(mu)基因联合新型人工载体A-W-MGC/CS治疗兔骨缺损的实验研究

作　者: 靳云龙
导　师: 刘丹平
学　校: 辽宁医学院
专　业: 外科学
关键词: 骨形态发生蛋白低氧诱导因子1α 重组腺病毒载体骨髓间充质干细胞血管生成组织工程骨缺损
分类号: R687.3
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的探讨新型重组腺病毒真核表达载Ad-CMV-BMP-2-IRES-hrGFP-1及Ad-CMV-HIF1α^mu-IRES-hrGFP-1转染骨髓间充质干细胞（bMSCs）后目的基因的表达及其对bMSCs成骨能力的影响并联合新型人工载体支架A-W-MGC/CS所构建的组织工程骨观察体内修复骨缺损的能力。方法（1）提取并扩增本实验室已成功构建好的腺病毒质粒Ad-CMV-HIF1α^mu-IRES-hrGFP-1及Ad-CMV-BMP-2 -IRES-hrGFP-1酶切后电泳并凝胶回收测质粒浓度。（2）在HEK293A细胞中包装病毒获得Adv-CMV-HIF-1α^mu1及Adv-CMV-BMP-2并检测病毒滴度。（3）体外培养兔骨髓间充质干细胞。测定最佳感染指数（MOI）,并以最佳MOI感染MSCs。（4）以Adv-CMV-HIF-1α^mu1及Adv-CMV-BMP-2基因转染bMSCs为实验组,Adv-CMV-BMP-2基因转染bMSCs为阳性对照组,未转染基因bMSCs为阴性对照组, ALP检测试剂盒检测3组细胞的ALP活性;（5）将新型人工载体A-W-MGC/CS载体支架材料进行表面修饰,并同多糖生物膜（PSBM）包好,制作骨缺损动物模型。将感染两种基因的MSCs与处理好的骨组织工程载体复合,植入骨缺损的动物模型体内。实验分组:A.实验组:BMP-2+HIF-1α^mu+A-W-MGC/CS+PSBM;B.阳性对照组:BMP-2+A-W-MGC/CS+PSBM; C.阴性对照组:A-W-MGC/CSD.自体骨移植组:自体骨+PSBM;（6）分别于术后4周、8周、12周各时间点取材,各组通过大体观察,X线检查、组织学观察,生物力学检测,墨汁灌注法等指标观察实验组及对照组骨缺损修复情况,探讨骨修复愈合机制。结果1.通过碱性磷酸酶检测发现HIF-1α^mu可以促进BMP-2表达,使ALP分泌增加。2.A组12周后骨缺损完全修复,支架材料基本降解,且骨塑形较好;A组新生骨的数量及质量优于B组。B组修复效果缓慢。C组骨缺损未修复,主要由纤维结缔组织和部分载体材料填充,D组骨缺损完全修复,A组与D组修复效果基本一致。3.12周后A组血管墨汁灌注密度较B组高,与D组基本一致,C组较少见墨汁。结论1.腺病毒介导的HIF-1α^mu可以上调BMP-2表达促进向成骨方向分化。2.腺病毒介导的HIF-1α^mu及BMP-2联合A-W-MGC/CS所构建的新型组织工程成骨具有良好的生物活性,并使缺损区血流量增加后修复大段骨缺损取得显著疗效,与自体骨移植效果基本一致,较单一使用BMP-2所构建的组织工程成骨对修复大段骨缺损疗效显著。

全文目录

摘要  4-8
  中文论著摘要  4-6
  英文论著摘要  6-8
英文缩略语  8-9
前言  9-11
实验材料与方法  11-19
结果  19-35
讨论  35-41
结论  41-42
本研究创新性的自我评价  42-43
参考文献  43-47
附录  47-60
  综述  47-57
  在学期间科研成绩  57-58
  致谢  58-59
  个人简介  59-60

腺病毒介导BMP-2及HIF-1α~(mu)基因联合新型人工载体A-W-MGC/CS治疗兔骨缺损的实验研究

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