学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

HDAC11对脂多糖处理的Kupffer细胞免疫耐受诱导功能的影响及其机制的研究

作　者: 连峥嵘
导　师: 龚建平；王晓波
学　校: 重庆医科大学
专　业: 外科学
关键词: 组蛋白去乙酰化酶11 Kupffer细胞白介素10 抗原递呈免疫耐受
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 23次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目的组蛋白去乙酰化酶11(Histone deacetylase 11, HDAC11)与细胞分裂周期,神经系统发育,肿瘤的发生以及免疫功能调节等有着紧密联系。最新研究表明,抑制单核巨噬细胞RAW264.7中HDAC11活性可促进该细胞内源性白介素10(interleukin 10, IL-10)的表达,从而诱导免疫耐受的产生。本实验旨在通过观察抑制脂多糖处理的Kupffer细胞(KCs)中HDAC11活性对其内源性IL-10的表达和细胞表面抗原递呈相关分子表达的影响,探讨抑制HDAC11诱导KCs免疫耐受产生的机制。方法将BALB/c小鼠KCs经密度梯度离心法分离,贴壁细胞用含20%胎牛血清(FCS)的RPMI1640培养液培养24h后随机分为三组:(1)空白对照组(空白组,继续以RPMI1640培养20h),(2)阴性对照组(阴性组,转染空白质粒control vector),(3)质粒组(转染HDAC11短发卡RNA质粒(HDAC11-shRNA)),三组均给予脂多糖。3h后,以Real time-PCR和Western-blot法检测各组KCs中HDAC11和IL-10基因及蛋白表达;流式细胞仪检测KCs表面分子MHC-II, B7-1, B7-2和CD40表达;将可识别卵清蛋白(ovalbumin, OVA)的转基因小鼠脾T细胞与上述三组KCs共培养,3d后3H-TdR标记法检测T细胞增殖情况;以酶联免疫吸附法(ELISA)检测共培养上清液中IL-2含量。结果(1)Real-time PCR结果:以HDAC11及IL-10的2-ΔCt值作为其表达量,以此值与GAPDH比值的X±S代表其基因相对表达水平。HDAC11在质粒组表达最低,为0.076±0.007,与两对照组相比(空白组0.145±0.012,阴性组0.141±0.013),差异具有统计学意义(P<0.05);而IL-10在质粒组表达最高,为0.084±0.006,与两对照组相比(空白组0.051±0.004,阴性组0.052±0.004),差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)Western-blot结果:以HDAC11及IL-10条带与GAPDH灰度值比值的X±S代表其蛋白相对表达水平。与Real-time PCR结果相似,HDAC11在质粒组表达最低,为0.132±0.012,与两对照组相比(空白组0.373±0.023,阴性组0.365±0.019),差异具有统计学意义(P<0.05);而IL-10在质粒表达最高,为0.218±0.018,与两对照组相比(空白组0.096±0.009,阴性组0.101±0.011),差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)流式细胞仪检测结果:质粒组KC表面抗原递呈相关分子表达低于空白对照组和阴性对照组。(4)共培养T细胞增殖结果:质粒组CPM值最低,为2163±146,与两对照组相比(空白组3654±165,阴性组3509±142),差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)ELISA结果:质粒组共培养上清液中IL-2含量最低,为463.7±38.9 pg/mL,与两对照组相比(空白组879.2±65.5 pg/mL,阴性组854.4±67.3 pg/mL),差异具有统计学意义(P<0.05)。上述数据中,两对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验证明,抑制KCs内HDAC11表达可促进其内源性IL-10的过量表达,从而进一步抑制KCs抗原递呈能力和共培养的T细胞增殖活化,诱导免疫耐受的产生。因此,HDAC11可能在肝脏这一免疫特惠器官中发挥重要作用,为后期应用HDAC11治疗晚期肝病内毒素血症及诱导肝移植后免疫耐受的动物实验和临床应用提供了良好的前期细胞试验基础。

全文目录

英汉缩略语名词对照  5-7
摘要  7-10
ABSTRACT  10-14
前言  14-15
1 实验材料  15-18
2 实验方法  18-27
3 结果  27-36
4 讨论  36-38
结论  38-39
参考文献  39-41
图片  41-43
文献综述  43-52
  参考文献  49-52
致谢  52-53
攻读硕士期间发表的文章目录  53

HDAC11对脂多糖处理的Kupffer细胞免疫耐受诱导功能的影响及其机制的研究

内容摘要

全文目录

相似论文