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肺腺癌A549细胞EMT中的线粒体功能蛋白质组学研究

作　者: 陈智鹏
导　师: 何庆瑜
学　校: 暨南大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: EMT 线粒体 SILAC IPA 癌症
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

上皮间质转换(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)是一种逆分化现象,即已分化的成体细胞获得干细胞样表型。癌细胞在EMT中细胞迁移和侵袭能力增强,故其在保持恶性增殖表型的同时,需额外产能以满足自身迁移需求。这一现象暗示线粒体(Mt)可能参与EMT。这是因为Mt除了在提供能量外,还可参与调控成体细胞和干细胞的分化。然而,Mt在EMT中的作用机制目前尚不清楚。目的：分析线粒体(Mt)在肺腺癌A549细胞EMT中所发挥的作用机制。方法：利用SILAC方法分别对经TGF-β1处理与未处理的A549细胞进行同位素标记；后自两组细胞中分别分离纯化具生物学功能的Mt；提取Mt总蛋白,并将两组蛋白等量混合；经一维电泳预分离、胶内酶解、质谱鉴定和MaxQuant定量分析获得蛋白鉴定信息；经统计得到差异表达蛋白(differentially expressed proteins, DEPs);进而以Ingenuity Pathways Analysis (IPA)和GO Stats软件对DEPs进行生物信息学功能分析,并用生物学方法进行功能验证。结果：本研究共鉴定到183个Mt DEPs。A549细胞经TGF-β处理后,其Mt蛋白组有141个蛋白上调,42个蛋白下调。IPA和GOStats的生物信息学分析表明：这些差异表达蛋白主要与细胞的迁移网络相关,且与Mt的增殖、氧化磷酸化、ATP生产相关。通过生物学方法,验证了Mt氧化磷酸化水平的上调。结论：Mt可能存在以下机制调节A549细胞的EMT过程。1)EMT中,Mt可通过增殖和周转以更新Mt蛋白,导致Mt中迁移和能量相关蛋白质含量增加；2)EMT中,需要Mt提高能量供给,以满足肺癌细胞迁移的额外能量需求。

全文目录

摘要  4-5
Abstract  5-6
目录  6-7
第一章前言  7-12
  1.1 研究意义  7-8
  1.2 国内外研究现状  8-12
第二章技术路线  12-13
第三章材料与方法  13-26
  3.1 主要材料  13-16
  3.2 主要仪器  16-17
  3.3 实验方法  17-26
第四章结果  26-48
  4.1 EMT模型的建立  26-28
  4.2 Mt的分离及纯度鉴定  28-30
  4.3 EMT中Mt表型的评价  30-32
  4.4 功能与定量蛋白质组学  32-45
  4.5 生物功能验证  45-48
第五章讨论  48-52
第六章总结  52-54
参考文献  54-59
附录  59-61
在校期间发表文章  61-62
致谢  62

肺腺癌A549细胞EMT中的线粒体功能蛋白质组学研究

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