学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

眼前房Foxp3~+Treg细胞与角膜移植术后免疫排斥反应机制的实验研究

作　者: 李姗姗
导　师: 史伟云
学　校: 济南大学
专　业: 眼科学
关键词: 免疫排斥 角膜移植术 Treg细胞 Th17细胞 c-rel
分类号: R779.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 11次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


目的:研究眼前房内Foxp3+Treg细胞与角膜移植术后免疫排斥反应的关系及c-rel因子对角膜移植术后前房Foxp3+Treg细胞分化的调控作用。方法:建立小鼠穿透性角膜移植术(PKP)模型。40只BALB/c小鼠随机分为二组:同种异系PKP组(A组)和原位PKP组(B组),术后裂隙灯观察各组是否有植片免疫排斥发生及排斥时间。病理学检测术后7天及14天时各组角膜植片及虹膜睫状体内炎细胞浸润情况;免疫荧光法检测术后7天及14天时各组植片及虹膜睫状体内CD4+细胞、IL-17+细胞及Foxp3+Treg细胞的表达;Real-time RT-PCR检测术后7天及14天时各组角膜及虹膜睫状体内CD4+T细胞的亚群Treg细胞的特征性转录因子(Foxp3)及c-rel的mRNA表达水平;Western Blot检测术后7天及14天时各组角膜及虹膜睫状体内Treg细胞的特征性转录因子(Foxp3)及Th17细胞特征性细胞因子(IL-17)的蛋白表达水平;流式细胞术检测术后14天时各组眼内CD4+T细胞、CD25+T细胞、CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达水平及Foxp3免疫荧光强度。结果:A组植片发生免疫排斥的平均时间为14.0±1.15天,B组未见免疫排斥反应发生。组织病理学显示A组及B组术后7天时角膜缘、前房角内及虹膜睫状体组织多量炎细胞浸润,可见炎细胞粘附于角膜内皮。术后14天,A组角膜植片大量炎细胞浸润,角膜内皮可见炎性细胞附着,大量新生血管长入植片。免疫荧光示术后7天A组及B组角膜及虹膜睫状体组织CD4、IL-17、Foxp3表达均增多,并可见CD4+IL-17+细胞攻击角膜内皮。术后14天,A组角膜及虹膜组织大量表达CD4、IL-17及Foxp3;B组角膜及虹膜组织散在表达CD4及IL-17,角膜及虹膜睫状体Foxp3表达量较术后7天无明显差别。Real-time RT-PCR示术后7天及14天,A组角膜及虹膜睫状体组织Foxp3 mRNA、CD25mRNA及c-rel mRNA表达量均显著升高,B组仅术后7天Foxp3 mRNA、CD25mRNA及c-rel mRNA表达量显著升高,术后14天表达量回落;术后7天A组角膜及虹膜睫状体IL-17mRNA表达量明显增高,术后14天降低,B组术后角膜及虹膜睫状体组织IL-17mRNA表达量始终保持在低水平。分析Foxp3mRNA/ IL-17mRNA的比率发现,此比率术后7天时,B组明显高于A组。c-relmRNA在各组、各时间点的变化趋势与Foxp3mRNA一致。Western Blot示术后14天,A组及B组角膜及虹膜睫状体组织Foxp3蛋白表达量均较7天时显著升高;A组术后14天角膜及虹膜睫状体组织IL-17蛋白表达量显著增高,B组IL-17蛋白表达量始终保持在低水平。Foxp3蛋白/IL-17蛋白比率在B组明显高于A组。流式细胞术检测示:术后14天,A组小鼠眼组织CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞2.6%,Foxp3平均荧光强度为58.557;B组小鼠眼组织CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T细胞1.117%,Foxp3平均荧光强度为114.444。结论:角膜移植术后,眼前房免疫微环境发生的极大的改变,这一环境的变化诱导了大量Foxp3+Treg细胞、IL-17+Th17细胞等活化的淋巴细胞在眼组织局部浸润,其中Treg细胞起了主要的促免疫耐受作用,不同的免疫微环境中聚集的Treg细胞具有不同的Foxp3表达量,其中高表达Foxp3的Treg细胞具有更强的免疫抑制功能;而Th17细胞在角膜移植术后起了重要的促炎作用。角膜移植术后免疫排斥反应的发生与否并不取决于单纯某种细胞的绝对数量,而取决于Treg细胞与促炎细胞之间的相对数量,Foxp3蛋白/IL-17蛋白的比率决定了免疫排斥反应发生与否。c-rel信号通路参与了角膜移植术后眼内Foxp3+Treg细胞发育形成的上游调控过程。在角膜移植免疫排斥反应发生、发展过程中,虹膜睫状体-角膜内皮途径起了关键性的作用。

全文目录


摘要  7-9
Abstract  9-11
主要符号表  11-12
引言  12-14
第一章 材料和方法  14-31
  1.1 小鼠穿透性角膜移植模型的建立和观察  14-16
  1.2 裂隙灯观察  16
  1.3 组织病理学检测  16-17
  1.4 免疫荧光检测  17-19
  1.5 角膜及虹膜睫状体组织转录因子及细胞因子分子生物学检测  19-23
  1.6 角膜及虹膜睫状体组织转录因子及细胞因子 Western Blot 检测  23-28
  1.7 眼组织细胞因子及转录因子流式细胞术检测  28-31
第二章 结果  31-40
  2.1 手术成功率及并发症  31
  2.2 角膜移植术后移植片的大体观察及排斥发生时间  31-32
  2.3 组织病理学结果  32-33
  2.4 免疫荧光染色  33
  2.5 RT-PCR 检测角膜及虹膜睫状体组织中细胞因子及转录因子的表达  33-36
  2.6 Western Blot 检测角膜及虹膜睫状体组织中细胞因子及转录因子的表达  36-38
  2.7 流式细胞术检测眼组织中 CD4+CD25+Foxp3+Treg 细胞的表达  38-40
第三章 讨论  40-45
  3.1 试验动物的选择和动物模型的建立  40
  3.2 虹膜睫状体-角膜内皮途径在角膜移植术后免疫排斥反应中的作用  40-41
  3.3 Foxp3+Treg 细胞在角膜移植术后免疫排斥反应中的作用  41-45
结论  45-46
参考文献  46-49
附录  49-57
综述  57-67
  参考文献  61-67
攻读学位期间研究成果  67-68
致谢  68

相似论文

  1. 类风湿关节炎患者TH17细胞及其相关细胞因子的表达及临床意义,R593.22
  2. 骨髓间充质干细胞在同种心脏移植中对Treg细胞作用的实验研究,R654.2
  3. 老年非小细胞肺癌外周血Th17和Treg细胞的表达及与免疫衰老的相关性研究,R734.2
  4. 雷公藤甲素对小鼠实验性结肠炎Thl7/Treg的调节作用,R285.5
  5. 白介素-10修饰的树突状细胞在大鼠角膜移植中作用的研究,R779.65
  6. CD8~+CD28~-调节性T细胞在特发性血小板减少性紫癜和急性白血病中的表达及临床意义,R554.6
  7. 重症肌无力患者体内Th17细胞和调节性T细胞分析,R746.1
  8. 大鼠到小鼠异种胰岛移植模型建立及其免疫学特点研究,R657.5
  9. 供体抗原特异性Treg细胞诱导小鼠胰岛移植耐受,R657.5
  10. 变应性鼻炎外周血Th1、Th2及Th17细胞功能研究,R765.21
  11. 日本血吸虫感染对Th17细胞应答影响的研究,R392
  12. 维药神香草对哮喘大鼠炎性因子和Th17细胞相关因子的影响,R29
  13. 医用多孔钽材料肌肉内植入免疫及组织形态学实验研究,R318.08
  14. 核心蛋白聚糖抑制淋巴细胞增殖及皮肤移植免疫排斥反应的研究,R965
  15. IL21及IL12诱导子宫内膜癌患者PBMCs抗肿瘤活性的研究,R737.33
  16. Th17/CD4~+FOXP3~+Treg细胞在儿童哮喘中失衡表达及意义,R725.6
  17. 辅助T细胞17(Th17)与调节T细胞(Treg)在局灶性脑缺血损伤中作用及机制研究,R651.1
  18. 不同HBV感染者外周血中Th17细胞、IL-21及其它细胞因子的分析,R512.62
  19. 小鼠肺纤维化模型中CD4~+CD25~+调节性T细胞及相关细胞因子的研究,R-332
  20. BoLA-NC1在妊娠奶牛和新生牛中的差异表达研究,S858.23
  21. 分期及化疗对乳腺癌患者外周血Treg细胞比例的影响及意义,R737.9

中图分类: > 医药、卫生 > 眼科学 > 眼外科手术学
© 2012 www.xueweilunwen.com