学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

CD8~+CD28~-调节性T细胞在特发性血小板减少性紫癜和急性白血病中的表达及临床意义

作　者: 李禹兵
导　师: 刘延香
学　校: 延安大学
专　业: 内科学
关键词: CD8~+T细胞 CD8~+CD28~-Treg细胞 ITP AL FCM PLT WBC
分类号: R554.6
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 21次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

[目的] CD8⁺CD28^-调节性T细胞（Regulatory T cells,Treg）是CD8⁺Treg细胞的一个重要亚群。是有启动负调控效应抗原的特异性抑制功能的成熟T细胞亚群,能对自身反应性的细胞进行免疫性调控。近几年来,在免疫应答与免疫耐受之间关系与平衡问题上CD8⁺CD28^-Treg细胞已成为研究的重要内容,可能参与自身免疫性疾病、肿瘤等的发病。本研究致力于通过对特发性血小板减少性紫癜（ITP）和急性白血病（AL）患者外周血中CD8⁺CD28^-Treg细胞和CD8⁺T细胞数量、表达情况观察,探讨其与ITP和AL的关系;通过治疗前、后与正常组作对照,探讨外周血中CD8⁺CD28^-Treg细胞和CD8⁺T细胞的变化在ITP和AL中发病与病情变化的规律及临床意义;为其发病及免疫学治疗提供可能的思路和理论依据。[对象与方法]1.研究对象:收集延安大学附属医院血液免疫科2009年12月～2011年2月所诊治的初诊ITP和AL病人98例,所有患者均由血液免疫科医师根据2007年张之南等主编的第三版《血液病诊断及疗效标准》的诊断标准确诊,排除其他系统疾病。对照组30例,为正常健康者,中位年龄为31.0（5-50）岁,男性19例,女性11例,在年龄、性别构成上与实验组无明显差异。98例研究对象中ITP 35例,临床均有不同程度的明显出血,病例由门诊和住院收集。中位年龄为40.0（3-80）岁,男性23例,女性12例,其中20例就诊时血小板为（20-50）×109/L,15例血小板<20×109/L。确诊后首选糖皮质激素治疗,其中12例接受等效剂量甲泼尼龙冲击治疗,9例联合大剂量丙种球蛋白。血小板恢复正常后,改为口服泼尼松。33例取得很好疗效。2例经上治疗后出血明显好转,但激素稍减量病情在短期内复发,后行脾脏切除。本组分别于确诊时、治疗血小板正常后4周检测外周血CD8⁺CD28^-Treg细胞和CD8⁺T细胞各一次,与正常组作对照。AL 63例,病例均经住院收集,中位年龄为25.0（2-81）岁,男性36例,女性27例。所有病例均经骨髓细胞学、细胞化学、流式细胞仪细胞免疫表型测定,急性淋巴细胞性白血病（ALL）做荧光原位杂交BCR/ABL、M3做PML-RARα、M2做AML1-ETO融合基因检测。确诊急性淋巴细胞性白血病（ALL）33例,混合型1例,急性非淋巴细胞性白血病（ANLL）29例,M₁ 3例,M₂ 5例,M₃ 8例,M₄ 7例,M₅ 4例,M₆ 2例。ALL分别采用VMP、VDLP、CEA化疗方案诱导缓解,其中1例BCR-ABL融合基因（+）者加服甲磺酸伊马替尼（Imatinibmesylate）;M3 PML-RARα融合基因（+）者联合应用全反式维甲酸（ATRA）+三氧化二砷（As₂O₃）及联合化疗。其他非淋巴细胞性白血病分别采用MA（DA或HA）、MEA（或DEA）化疗方案诱导缓解。经二疗程后临床完全缓解（CR）39例,21例部分缓解（PR）,1例在第一疗程化疗期间死亡,第二疗程化疗后放弃治疗、死亡各1例。60例资料完整者分别于确诊时、化疗PR、CR时各抽外周血检测CD8⁺CD28^-Treg细胞和CD8⁺T细胞一次,与正常组作对照。2.方法:清晨取病人空腹静脉血7ml,①应用CD3荧光标记设门的微量流式细胞仪检测ITP、AL患者治疗前、后及正常对照组外周血中CD8⁺CD28^-Treg细胞、CD8⁺T细胞数量的表达情况;②用Cellquest软件分析数据,记录各群细胞所占的百分比,减去非特异对照组,并进行综合分析;③应用德国coulter jens公司提供的电阻型血细胞分析仪,检测出ITP和AL患者的血小板（PLT）和白细胞（WBC）参数。严格依据说明书进行操作;④统计学处理,运用SPSSl6.0统计软件包分析,符合正态分布的计量资料的组间比较用独立样本t检验;不符合正态分布的计量资料的组间比较用秩和检验;直线相关性分析,采用非参数相关系数Spearman秩相关检验。确定检验水准为P=0.05。[结果]1.外周血中CD8⁺T细胞、CD8⁺CD28^-T细胞免疫表型分析:1.1 ITP患者治疗前外周血中CD8⁺T细胞、CD8⁺CD28^-T细胞的数量与正常组作对照:ITP治疗前CD8⁺T细胞增高,而CD8⁺CD28^-T细胞明显降低,其差异显著均有统计学意义（P<O.05）。治疗后CD8⁺T细胞、CD8⁺CD28^-T细胞分别与治疗前相比较,CD8⁺T细胞降低,而CD8⁺CD28^-T细胞明显升高,同样差异均有统计学意义（P<O.05）。治疗后与正常组作对照,CD8⁺T细胞、CD8⁺CD28^-T细胞的数量均趋于正常,两组无显著差异。其中2例经治疗后出血明显好转,但激素稍减量病情在短期内复发,后行脾脏切除,且多次检测外周血中CD8⁺CD28^-T细胞比例变化不明显。1.2 AL患者治疗前外周血中CD8⁺T细胞、CD8⁺CD28^-T细胞的数量均高于正常对照组,差异显著有统计学意义（P<O.05）。PR、CR后（二疗程后）外周血中CD8⁺T细胞、CD8⁺CD28^-T细胞的数量均低于治疗前,CR较PR降低的更明显,尤其CD8⁺CD28^-T细胞,CR较PR组差异均有统计学意义（P<O.05）。与正常组作对照,CR趋于正常,无显著性差异;PR略高于正常对照组有差异性(（P<O.05）。2.外周血中CD8⁺CD28^-/CD8⁺T细胞免疫表型分析:ITP治疗前CD8⁺CD28^-/CD8⁺T细胞的比值低于正常对照组,AL治疗前高于正常对照组,差异均有统计学意义（P<O.05）。ITP经治疗血小板正常后、AL二疗程后CR、PR,分别与治疗前相比较,三组均有统计学意义（P<O.05）。与正常组作对照,ITP治疗后有统计学意义（P<O.05）,AL治疗后两组均无统计学意义。3. ITP、AL患者外周血中CD8⁺T细胞与CD8⁺CD28^-Treg细胞相关性分析通过ITP、AL患者外周血中CD8⁺T细胞与CD8⁺CD28^-Treg细胞之间作Spearman秩相关检验,结果显示:外周血中CD8⁺T细胞与CD8⁺CD28^-Treg细胞在ITP患者中无相关关系,（r=0.151,P=0.386）;在AL患者中存在正相关关系,（r=0.857,P=0.000）。4. ITP和AL患者外周血中CD8⁺T细胞、CD8⁺CD28^-Treg细胞与PTL数量和WBC数量相关性分析采用非参数相关系数Spearman秩相关检验,结果显示:在ITP患者中外周血CD8⁺T细胞、CD8⁺CD28^-Treg细胞均与PTL数量之间无相关性;在AL患者中外周血CD8⁺T细胞、CD8⁺CD28^-Treg细胞同样与WBC数量之间无相关性,即（r=0.116,P=0.507）、（r=-0.082,P=0.638）、（r=-0.070,P=0.6051）、（r=-0.051,P=0.704）。[结论]1.外周血中CD8⁺CD28^-Treg细胞、CD8⁺T细胞的表达水平与ITP的发生发展可能有密切关系,其高低,可反映ITP的细胞免疫失调程度和病情活动控制情况,及CD8⁺CD28^-Treg细胞可能是ITP患者细胞免疫中一个重要参与其发病机制的细胞群。2.外周血中CD8⁺CD28^-Treg细胞、CD8⁺T细胞与AL发病机理有一定的相关性。监测其比例的表达水平,可能对AL的治疗疗效及判断预后有一定临床指导价值。治疗后CR的患者外周血中CD8⁺CD28^-Treg细胞数量均低于PR的患者,且趋于正常。同时也显示AL病人存在着严重细胞免疫受抑。3.ITP患者外周血中CD8⁺CD28^-Treg细胞的表达水平较正常人低,CD8⁺T细胞的表达较正常人高;而AL患者外周血中CD8⁺CD28^-Treg细胞、CD8⁺T细胞的表达水平均较正常人高。4.外周血中CD8⁺CD28^-Treg细胞的表达水平在ITP患者中与CD8⁺T细胞无相关性;而在AL患者中与CD8⁺T细胞呈正相关性;外周血中CD8⁺CD28^-Treg细胞的表达水平在ITP和AL患者中分别与PTL数量和WBC数量之间均无相关性。ITP患者的免疫功能紊乱较容易纠正,AL次之。

全文目录

摘要  5-9
Abstract  9-15
引言  15-17
资料与方法  17-24
  一、临床资料  17-19
  二、主要仪器和试剂  19-22
  三、检测原理  22
  四、实验方法及步骤  22-23
  五、统计学分析  23-24
结果  24-33
讨论  33-39
参考文献  39-44
小结  44-47
文献综述  47-57
  参考文献  52-57
致谢  57-58
攻读学位期间发表的论文  58

CD8~+CD28~-调节性T细胞在特发性血小板减少性紫癜和急性白血病中的表达及临床意义

内容摘要

全文目录

相似论文