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LAMP快速检测日本血吸虫感染性钉螺、卡氏肺孢子虫及恶性疟原虫的研究

作　者: 邓鹏程
导　师: 杨秋林
学　校: 南华大学
专　业: 病原生物学
关键词: 环介导等温扩增检测日本血吸虫卡氏肺孢子虫恶性疟原虫
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification.LAMP)快速检测日本血吸虫( Schistosoma japonicum)感染性钉螺、卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)、恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)的研究。方法以日本血吸虫、卡氏肺孢子虫、恶性疟原虫的特异基因为靶序列,利用PrimerExplorer V3软件分别设计扩增靶基因的4条LAMP引物,酚氯仿法分别提取三种病原体的DNA,取适量模板DNA加入配制并优化好的LAMP反应体系,65℃下60 min,完成对靶病原体基因的扩增,通过肉眼观察、SYBR Green I染色及电泳来判定扩增结果。LAMP扩增产物经酶切进一步鉴定;设立对照组评价特异性;10倍系列稀释模板检测LAMP敏感性。结果模板经LAMP扩增后,肉眼、SYBR Green I染色和电泳均能观察到LAMP扩增产物的出现,电泳后呈LAMP特征性梯状条带,对照组均无扩增产物;三种病原体LAMP扩增产物经相应限制性内切酶酶切鉴定正确;结果显示三种病原体LAMP检测方法特异;LAMP可检测到日本血吸虫、卡氏肺孢子虫、恶性疟原虫的敏感性分别是1pgDNA/μL,1pgDNA/μl,1.5个疟原虫/107RBC ,高于或与PCR敏感性相当。结论建立了日本血吸虫、卡氏肺孢子虫、恶性疟原虫特异、敏感和快速的LAMP检测方法。

全文目录

主要缩略语英文索引  5-6
中文摘要  6-7
英文摘要  7-9
前言  9-11
第一章 LAMP 快速检测日本血吸虫感染性钉螺的研究  11-27
  第一节 LAMP 快速检测日本血吸虫尾蚴的研究  11-19
    材料与方法  11-15
    实验结果  15-17
    讨论  17-19
  第二节 LAMP 快速检测日本血吸虫感染性钉螺的研究  19-27
    材料与方法  19-22
    实验结果  22-25
    讨论  25-27
第二章 LAMP 快速检测卡氏肺孢子的研究  27-35
  材料与方法  27-29
  实验结果  29-33
  讨论  33-35
第三章 LAMP 快速检测恶性疟原虫的研究  35-40
  材料与方法  35-37
  实验结果  37-39
  讨论  39-40
结论  40-41
参考文献  41-46
文献综述  46-55
研究成果及发表论文  55-56
致谢  56

LAMP快速检测日本血吸虫感染性钉螺、卡氏肺孢子虫及恶性疟原虫的研究

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