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牛磺酸拮抗锰致海马神经元损伤中ERK1/2变化的实验研究

作　者: 刘楠楠
导　师: 郭松超
学　校: 广西医科大学
专　业: 营养与食品卫生学
关键词: 锰牛磺酸海马神经元细胞 ERK1/2
分类号: R151
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

【目的】应用新生大鼠海马神经元细胞原代培养的方法,探讨ERK 1/2在介导牛磺酸保护锰诱导海马神经元细胞氧化损伤的机制。【方法】取SPF级新生24h以内的Wistar大鼠脑部海马组织进行海马神经元细胞原代培养,培养至最佳状态后,用于实验。用于培养的海马神经元细胞分组为:①空白对照组;②牛磺酸对照组(Tau:4mmol/L);③低浓度染锰组(Mn:0.2mmol/L);④中浓度染锰组(Mn:0.8mmol/L);⑤高浓度染锰组(Mn:1.2mmol/L);⑥低浓度干预组(Tau:4mmol/L,Mn:0.2mmol/L);⑦中浓度干预组(Tau:4mmol/L,Mn:0.8mmol/L);⑧高浓度干预组(Tau: 4mmol/L,Mn:1.2mmol/L)。各处理组在加以处理因素24小时后终止培养,在普通光学显微镜下观察后进行以下检测:MTT实验测试细胞活力、荧光测定法检测细胞内活性氧族的生成和增加、Western Blot法检测ERK 1/2蛋白表达、实时荧光定量PCR检测ERK1/2蛋白mRNA的相对表达。【结果】①锰可致海马神经元细胞形态学改变,细胞形态改变随着染锰浓度的增加而增大,对应染锰浓度的牛磺酸干预组细胞形态较为完整,存活细胞量较多;②MTT结果显示:海马神经元细胞经锰损伤后,细胞活力明显下降,与空白对照组和牛磺酸对照组比较,有显著性差异(P<0.01)。使用牛磺酸干预后,低、中、高浓度的牛磺酸干预组的活力与对应浓度的低、中、高染锰组对比,具有显著性差异(P<0.01),活力均比后者提高;③ROS检测显示:与空白组和牛磺酸对照组比较,锰损伤后各组ROS均明显增高。空白对照组与牛磺酸对照组比较,无统计学意义。牛磺酸干预各组细胞ROS降低,与同等浓度的染锰组对比,均有显著性差异(P值均<0.01)。4个时间点测量ROS含量存在显著性差异,F= 18.107,P<0.01;④低浓度干预组ERK1/2蛋白表达量与空白对照组、牛磺酸对照组无差别;在低浓度染锰组、中浓度染锰组的ERK1/2蛋白表达量均高于对应同等染锰浓度的干预组;在高浓度染锰组与高浓度干预组的ERK1/2蛋白表达量相比无差别;⑤低浓度干预组ERK1/2的mRNA相对表达量与空白对照组、牛磺酸对照组无差别,在低浓度染锰组、中浓度染锰组和高浓度的染锰组的ERK1/2mRNA相对表达量均低于对应同等染锰浓度的干预组。【结论】锰可致海马神经元细胞氧化应激损伤,牛磺酸可拮抗锰致海马神经元氧化应激损伤,ERK1/2在牛磺酸拮抗锰致海马神经元细胞氧化应急损伤保护作用中起到重要作用。

全文目录

缩略语表  4-5
摘要  5-7
ABSTRACT  7-10
前言  10-12
材料与方法  12-20
  1、材料  12-15
    1.1 实验动物  12
    1.2 仪器设备  12-13
    1.3 主要试剂  13
    1.4 常用溶液配制  13-15
  2、方法  15-19
    2.1 海马神经元培养  15
    2.2 实验分组  15-16
    2.3.M TT 法检测细胞活力  16
    2.4 荧光测定法检测细胞内活性氧族  16-17
    2.5.T RIzol 法分离细胞成分  17
    2.6.B CA 法进行总蛋白定量  17-18
    2.7.W estern Blot 法检测ERK1/2 蛋白表达  18
    2.8.R NA 逆转录  18
    2.9 实时荧光定量 PCR 检测 ERK1  18-19
  3、统计学分析  19-20
结果  20-27
  1、形态学观察  20-21
  2、牛磺酸干预后对海马神经元细胞的活性影响  21-22
  3、牛磺酸对锰致海马神经元细胞损伤后 ROS 的影响  22-23
  4、Western blot 测定 ERK1/2 表达  23-25
  5、荧光定量PCR 法(RT-PCR)检测ERK1/2 基因表达变化  25-27
讨论  27-35
结论  35-36
附图  36-37
参考文献  37-41
文献综述  41-49
  参考文献  46-49

牛磺酸拮抗锰致海马神经元损伤中ERK1/2变化的实验研究

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